核酸提取的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之紫外光譜法:即使是蕞小的樣品(1~2L)也可以用紫外光譜法進(jìn)行測(cè)量。DNA、RNA和單個(gè)核苷酸和寡核苷酸在260納米處吸收紫外線。在1厘米的比色皿中,1.0的A260相當(dāng)于50μg/mLDNA和40μg/mLRNA。A260/A280比率提供了關(guān)于分離的核酸純度的信息。純的DNA和RNA的比率分別為1.8和2.0。污染物如蛋白質(zhì)、苯酚通常以不同的波長(zhǎng)吸收光線。如果在230、280或320納米處也有吸收,這表明分離物中存在雜質(zhì)。如果該比率小于1.8,則可能是蛋白質(zhì)的污染。A230/260的比率>1也說(shuō)明了這一點(diǎn)。磁珠法核酸提取方式。南京正揚(yáng)生物支原體DNA提取操作流程
磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見(jiàn)誤區(qū)--樣品取用越多,提取效果越好在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下,往往核酸提取效果不好,很多老師就會(huì)采用多取樣本的方式增加核酸提取量。但簡(jiǎn)單地增加樣本取樣量,有時(shí)會(huì)引入過(guò)多的雜質(zhì),超出裂解液裂解能力,也會(huì)使提取效率降低,所以并不推薦通過(guò)簡(jiǎn)單的增加樣本取樣量的方式來(lái)達(dá)到增加提取量的目的。如果確實(shí)是由于樣本量不足而引起的提取量過(guò)低,建議在前處理先經(jīng)過(guò)富集或者濃縮步驟再開(kāi)始提取。或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出來(lái)也是一種解決方法。杭州正揚(yáng)生物復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒核酸提取原理核酸提取的質(zhì)量要求。
磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見(jiàn)誤區(qū)--某一種磁珠好,就應(yīng)該在所有試劑配方中使用效果都好磁珠的種類是多種多樣的,粒徑大小不同,分散性不同,磁響應(yīng)時(shí)間不同,包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同,外層修飾官能團(tuán)不同,包被密度不同,官能團(tuán)臂長(zhǎng)不同,會(huì)導(dǎo)致磁珠特性千差萬(wàn)別。所以不同磁珠所適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)和體系也是不同的。就像同樣是核酸提取的試劑,配方也并不完全相同,同樣應(yīng)用于核酸提取的磁珠,性質(zhì)也并非完全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表現(xiàn)出了更高的吸附效率,有的磁珠更適用于微量核酸提取。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系,有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系。有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快,更適合磁棒式自動(dòng)提取儀;有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),更適合移液式自動(dòng)提取儀。很少有一種磁珠能適用于所有實(shí)驗(yàn)的情況,除了固定的試劑盒配合,多數(shù)情況下,磁珠和試劑體系都要做一定時(shí)間的配合調(diào)整。
關(guān)鍵因子及對(duì)核酸提取的影響在進(jìn)行核酸提取或純化時(shí),必須密切注意一些因素,如pH值、鹽濃度、溫度、緩沖體積和潛在的乙醇污染。這些因素中的每一個(gè)都會(huì)極大地影響下游實(shí)驗(yàn)的得率、質(zhì)量和成功率。1.非蕞適pH值或鹽濃度可改變核酸的電荷,導(dǎo)致核酸不能與離心柱結(jié)合,或?qū)е卤椒?氯仿錯(cuò)誤的溶解核酸。2.緩沖液體積不正確,可導(dǎo)致不完全裂解,中和或間接稀釋洗脫的核酸。3.乙醇污染可以抑制下游的酶反應(yīng),并使樣品從瓊脂糖凝膠中飄浮出來(lái)。磁珠法核酸提取可以簡(jiǎn)單、快速、高效地實(shí)現(xiàn)多種類型樣本的核酸提取;不僅可以節(jié)省時(shí)間,還可以減少手工操作引起的失誤,提高每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性及均一性。南京有沒(méi)有公司做支原體核酸提取試劑盒開(kāi)發(fā)?
宿主細(xì)胞DNA殘留問(wèn)題備受關(guān)注。研究表明,生物制品中來(lái)源于宿主細(xì)胞的外源性DNA具有傳遞腫 瘤或病毒相關(guān)基因的可能性。各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA有明確的檢測(cè)要求和標(biāo)準(zhǔn)。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取純化試劑盒及檢測(cè)系列產(chǎn)品,可滿足不同宿主及靶標(biāo)的檢測(cè)需求,試劑盒靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求,可以為客戶提供完整的和定制化的整體解決方案。歡迎聯(lián)系我們南京正揚(yáng)支原體核酸提取試劑盒對(duì)樣品的需求量是多少?南京正揚(yáng)生物復(fù)制型腺相關(guān)病毒核酸提取常見(jiàn)問(wèn)題
CHO細(xì)胞殘留核酸提取。南京正揚(yáng)生物支原體DNA提取操作流程
南京正揚(yáng)生物自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細(xì)胞DNA/RNA,產(chǎn)品使用事項(xiàng)包括以下幾點(diǎn):1.磁珠懸浮液嚴(yán)禁冷凍和離心,以免損傷磁珠,磁珠使用前務(wù)必充分混勻。2.裂解液結(jié)合液、洗滌液A、洗滌液B在低于10℃時(shí)可能出現(xiàn)白色結(jié)晶,若出現(xiàn)沉淀,請(qǐng)37℃水浴重新溶解后使用。3.請(qǐng)盡量在完成樣本純化處理當(dāng)天進(jìn)行后續(xù)的DNA檢測(cè),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀本試劑盒說(shuō)明書,并嚴(yán)格按照操作步驟完成操作。南京正揚(yáng)生物支原體DNA提取操作流程