根據(jù)FDA2006年發(fā)布的關(guān)于RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的指南和2018年新更新的檢測指南征求意見稿，目前RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒檢測的金標準是共培養(yǎng)法，即將測試樣品(病毒載體上清液、生產(chǎn)終末細胞、體外轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞等)與允許細胞系進行共培養(yǎng)，至少5次傳代以擴增任何潛在的RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒，然后在指示階段，通過檢測特異性核酸、蛋白的方法進行測定，qPCR/RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，是RCR/RCL檢測的優(yōu) 選方法。復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測。廣州正揚生物復(fù)制型慢病毒檢測廠家
美國FDA2020年發(fā)布的關(guān)于RCR/RCL病毒檢測指南提出：對于RCR/RCL的檢測包含指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/Q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）、PERT法（產(chǎn)物增強性逆轉(zhuǎn)錄檢測法）共4種檢測方法。其中，指示細胞培養(yǎng)法和Q-PCR法較常用，但各國監(jiān)管機構(gòu)推薦并且可以接受的方法還是以指示細胞培養(yǎng)法為準。由于細胞產(chǎn)品一般要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，可使用Q-PCR法先進行質(zhì)控放行，但指示細胞培養(yǎng)法應(yīng)同時進行確認。合肥正揚生物病毒檢測產(chǎn)品CAR-T細胞醫(yī)治產(chǎn)品中重組腺相關(guān)病毒檢測的監(jiān)管要求。
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒/RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的特點：①檢測試劑盒采用qRT-PCR原理，操作便捷，2-3小時可出結(jié)果。②試劑盒檢測體系經(jīng)過精心研發(fā)，可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應(yīng)中產(chǎn)生擴增，可以蕞大程度的減少檢測過程中污染情況的發(fā)生。③RCL和RCR病毒檢測方法成熟，試劑盒性能穩(wěn)定，檢測靈敏度高，可以快速準確的獲得供試品中靶向基因的含量，幫助研究者進行分析。歡迎聯(lián)系！
實時定量PCR方法(Q-PCR法)復(fù)制型慢病毒檢測原理：目前許多CAR-T申報企業(yè)采用Q-PCR／PCR方法直接測定終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi—gag序列，考慮到細胞產(chǎn)品一般需要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，采用基于細胞培養(yǎng)方法，時間周期較長，建議在細胞產(chǎn)品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養(yǎng)方法測定RCL，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風(fēng)險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用快速放行方法(如PCR方法)?；赒-PCR法測定復(fù)制型慢病毒載體，主要是針對VSV-G序列設(shè)計定量引物，通過繪制標準曲線，對RCL予以定量。qPCR法復(fù)制型慢病毒檢測的工作流程。
實時熒光定量PCR法rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測試劑盒的操作流程包括病毒DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結(jié)果分析四個環(huán)節(jié)。病毒DNA提取包含樣品前處理、樣品裂解液消化、病毒DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配制時需先將試劑放置于室溫，避光放置30min，直至試劑融化，各個試劑組分混勻后按照說明書進行配制并分裝。在實驗室，注意分區(qū)操作，降低實驗發(fā)生污染的風(fēng)險。
實時熒光定量PCR法rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測試劑盒的操作流程包括病毒DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結(jié)果分析四個環(huán)節(jié)。病毒DNA提取包含樣品前處理、樣品裂解液消化、病毒DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配制時需先將試劑放置于室溫，避光放置30min，直至試劑融化，各個試劑組分混勻后按照說明書進行配制并分裝。在實驗室，注意分區(qū)操作，降低實驗發(fā)生污染的風(fēng)險。 南京正揚有復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的裝量是多少？廣州正揚生物復(fù)制型慢病毒檢測廠家
南京正揚有復(fù)制型病毒檢測試劑盒試劑盒性能如何？廣州正揚生物復(fù)制型慢病毒檢測廠家
復(fù)制性慢病毒/復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的必要性：RCL/RCR會同逆轉(zhuǎn)錄病毒載體一樣，整合在細胞基因組中，從而產(chǎn)生因整合導(dǎo)致的原ai基因激 活，抑ai基因破壞或者使促細胞生長的因子高度表達而造成二次仲瘤的風(fēng)險。因其具有復(fù)制性，即產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒，增加了因整合而造成的二次仲瘤的風(fēng)險。雖然目前在病毒制備體系方面改進很多，很大程度上降低了RCL/RCR產(chǎn)生的風(fēng)險，但是仍不能完全排除，美國FDA要求對于γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體，需要在整個生產(chǎn)過程及不同階段進行RCL/RCR檢測，需要對載體生產(chǎn)用主細胞庫、工作細胞庫、生產(chǎn)終末細胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過4天的載體轉(zhuǎn)到細胞進行檢測，廣州正揚生物復(fù)制型慢病毒檢測廠家