貼壁細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品，包括從Researchgrade到cGMP等級(jí)的無動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì)，轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù)，支持ATMP（AdvanceTherapyMedicinalProducts）藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化；以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細(xì)胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn)，以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù)，分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來的技術(shù)紅利，終為細(xì)胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個(gè)生命科學(xué)行業(yè)賦能！更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題，歡迎咨詢上海曼博生物。???如想申請PEI試用裝，請關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”，即可參加！?PEI轉(zhuǎn)染試劑的主要分子量是多少？貼壁細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用

1、細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲(chǔ)存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動(dòng)平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲(chǔ)存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報(bào)告基因的表達(dá)。如想申請PEI試用裝，請關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”，即可參加！工業(yè)用途PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異使用PEI轉(zhuǎn)染時(shí)，一般和DNA的比例是多少？

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chǔ)存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過濾，儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水，加入20ml1M的HEPES，調(diào)pH值到7.4，定容至1L，過濾（0.2μm濾膜）后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。如想申請PEI試用裝，請關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”，即可參加！?

對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。?如想申請PEI試用裝，請關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”，即可參加！?中國地區(qū)代理Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑的是誰？

產(chǎn)品簡介Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級(jí)的即用型線性聚乙烯亞胺（PEI轉(zhuǎn)染試劑）溶液，由PEIMAX配置而成，采用0.1umPES無菌過濾器，完全消除支原體污染風(fēng)險(xiǎn)。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物，這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用，有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究，可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲（SF9、SF21）等真核細(xì)胞系，可作用于大到135,000個(gè)核苷酸的質(zhì)粒，所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染。Transporter5可節(jié)省試劑準(zhǔn)備時(shí)間，加快項(xiàng)目進(jìn)度。經(jīng)過嚴(yán)格的性能檢測，確保品質(zhì)，在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復(fù)性好、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。如想申請PEI試用裝，請關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”，即可參加！哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比高？天津PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適用于CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染

PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢？貼壁細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！如想申請PEI試用裝，請關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”，即可參加！?貼壁細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用