對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!?哪里可以買到23966-1?全球PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝有使用說(shuō)明嗎
材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲(chǔ)存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過(guò)濾,儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過(guò)濾(0.2μm濾膜)后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細(xì)胞分盤:通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!?陜西非脂質(zhì)體PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝PEI轉(zhuǎn)染試劑使用的時(shí)候有什么注意事項(xiàng)?
注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。?如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!?
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見(jiàn)細(xì)胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點(diǎn):優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達(dá)水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細(xì)胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染測(cè)試。將eGFP表達(dá)質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細(xì)胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過(guò)95%的細(xì)胞表達(dá)eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!有人知道PEI轉(zhuǎn)染試劑的價(jià)格么?
1、細(xì)胞分盤:通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲(chǔ)存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動(dòng)平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲(chǔ)存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測(cè)到報(bào)告基因的表達(dá)。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢(shì)?貼壁細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝效果怎么樣
分子量為25000的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑即Polysciences23966轉(zhuǎn)染效率比較高.全球PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝有使用說(shuō)明嗎
對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!?如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!?全球PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝有使用說(shuō)明嗎