國產(chǎn)PEI轉染試劑品牌比較

來源: 發(fā)布時間:2023-02-17

準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Polysciences產(chǎn)品,歡迎咨詢上海曼博生物!Polysciences轉染試劑怎么樣?國產(chǎn)PEI轉染試劑品牌比較

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材料:質粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。


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瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。


準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。

依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。 哪里可以買到GMP等級的PEI轉染試劑?

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穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。


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如何優(yōu)化PEI轉染試劑轉染時的比例?國產(chǎn)PEI轉染試劑品牌比較

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質,轉染試劑、病毒轉導試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,終為細胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!國產(chǎn)PEI轉染試劑品牌比較

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