FBS替代品血小板裂解液如何制備

來源: 發(fā)布時間:2022-07-11

細胞培養(yǎng)基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREMPrime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基礎培養(yǎng)基(即MEMα、GlutaMAX補充劑、無核苷)和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細胞培養(yǎng)基。3.應在完全細胞培養(yǎng)基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mLPLSUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細胞培養(yǎng)基可在4°C下儲存,并穩(wěn)定約4周儲存和穩(wěn)定性ELAREMPrime在標簽上注明的失效日期之前是穩(wěn)定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C(或在-80°C進行長期儲存)冷凍儲存時穩(wěn)定。解凍后,建議將未使用的ELAREMPrime樣品分裝并在-20°C下重新冷凍。應避免ELAREMPrime的重復凍融循環(huán),因為這會導不溶性顆粒形成的增加。使用時,只需預熱一份完整的細胞培養(yǎng)基,并將剩余的培養(yǎng)基冷藏在4-8°C。用血液里的血小板濃縮物反復冷凍/解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。FBS替代品血小板裂解液如何制備

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血小板裂解液解凍后請立即進行培養(yǎng)基的配制,配置好的培養(yǎng)基在2-8°C環(huán)境下保存并盡快使用,不建議超過21天。如解凍后的原瓶無法全部使用,建議按需分裝成合適的小瓶中進行-20°C保存一旦產(chǎn)品瓶或袋經(jīng)過初始解凍過程,建議盡快將產(chǎn)品置于基礎培養(yǎng)基中。盡管對于儲存在2-8°C的準備好的含有hPL的培養(yǎng)基,Sexton的內(nèi)部測試有效期為21天,但建議客戶進行內(nèi)部驗證研究,以確定其基于血小板裂解液的完整培養(yǎng)基的有效期。使用的基礎培養(yǎng)基和添加劑等變量可能會縮短或延長完整培養(yǎng)基產(chǎn)品的有效期。進口血小板裂解液保存溫度有誰知道血小板裂解液主要含有哪些生長因子?

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血小板裂解液作為胎牛血清的替代品,間充質干細胞/基質細胞(MSCs)被定義為自我更新的多能祖細胞,能夠分化成中胚層來源的其他細胞類型,如脂肪細胞,骨細胞和軟骨細胞。人源血小板裂解液是無動物源血清培養(yǎng)補充劑,能在細胞培養(yǎng)時提供細胞生長所需動力,目前已被大規(guī)模的使用在干細胞及原代細胞培養(yǎng)過程中。人源血小板裂解物除了擁有比富血小板血漿更高的生長因子濃度,更用特殊工藝去除了細胞碎片,大幅降低了使用過程中的免疫原性。

為了排除肝素對于細胞增長的抑制作用可能與防腐劑(這里采用芐醇作為防腐劑添加到UFH或LMWH中)有關。我們對不添加防腐劑的肝素進行了相同實驗,結果對AT-MSC和BM-MSC細胞增殖抑制趨勢相同。在隨后的傳代培養(yǎng)到3代中的累積的群體中,兩種肝素UFH和LMWH對MSC增殖的影響也變得明顯,血小板裂解液中肝素濃度較低時累積細胞群體倍增指數(shù)(cPD)較高,CFU-F的塑料粘附生長性能是MSCs培養(yǎng)的先決條件,在96孔板中通過有限稀釋的方法結合泊松統(tǒng)計進行CFU-F試驗,顯示集落形成率CFU-F在高濃度UFH時中度降低,而在高濃度Enoxaparin(LMWH)時明顯降低。這些結果表明高濃度的LMWH減少了CFU-F的形成,這與已報道的其他研究結論一致。GMP等級的血小板裂解液是不含動物源成分的。

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血小板中含有很多不同的細胞生長因子,包括PDGF,VEGF,EGF等,實踐證明,血小板分泌的細胞生長因子能夠對多種細胞起到支持生長的作用,可以完全替代胎牛血清(FBS)甚至于在支持一些細胞培養(yǎng)的效果上優(yōu)于FBS。本產(chǎn)品是將多人份濃縮血小板混合后裂解而成,產(chǎn)品均一性好,經(jīng)過了嚴格安全性有效性質量檢控。人血小板裂解液能夠支持包括間充質干細胞成骨分化,成脂分化,造血干細胞以及誘導性多能干細胞的生長等。是這些細胞公認的動物源血清替代品。誰知道血小板裂解液進口是不是很難?性能好血小板裂解液肝素怎么加

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Sextonh的PL血小板裂解液產(chǎn)品接收時處于干冰運輸?shù)睦鋬鰻顟B(tài)。收到hPL產(chǎn)品后,建議客戶立即將產(chǎn)品儲存在-20°C的環(huán)境中。Sexton有數(shù)據(jù)支持運輸期間短時間的干冰保存對產(chǎn)品性能(包括pH值、滲透壓、總蛋白和細胞生長)沒有顯著影響。SextonhPL產(chǎn)品的解凍應按照Sexton產(chǎn)品說明文件中的建議使用37°C水浴進行。Sexton不建議使用4°C冰箱或室溫解凍方法,因為這些做法尚未經(jīng)過測試或作為任何內(nèi)部驗證的一部分。已知使用冰箱或室溫解凍會導致更高水平的纖維蛋白/纖維蛋白原碎片,并可能導致產(chǎn)品性能下降。37°C水浴是Sexton用于所有批次放行測試的內(nèi)部解凍方法,也是與SextonhPL產(chǎn)品相關的所有驗證的解凍方法。FBS替代品血小板裂解液如何制備

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