寵物PCR技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測(cè)的應(yīng)用

說(shuō)PCR儀(尤其是實(shí)時(shí)熒光PCR儀)是動(dòng)物診斷工具的中流砥柱毫不為過。然而，即時(shí)、快速和準(zhǔn)確的檢測(cè)是廣大獸醫(yī)站和養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)檢測(cè)儀器更高的訴求。面對(duì)傳染性疾病，用戶對(duì)便攜、易操作、準(zhǔn)確性高、成本相對(duì)低廉的檢測(cè)設(shè)備需求更為迫切。事實(shí)上，以微流控芯片作為耗材，搭配后端定量PCR的檢測(cè)在臨床檢測(cè)領(lǐng)域已有成型產(chǎn)品——即巧亦捷全自動(dòng)薄膜微流控快速核酸檢測(cè)一體機(jī)。它實(shí)現(xiàn)了從核酸提取、PCR擴(kuò)增、熒光檢測(cè)全流程自動(dòng)化芯片內(nèi)完成，樣本進(jìn)，結(jié)果出，檢測(cè)時(shí)間短，全程無(wú)需專業(yè)技術(shù)人員參與，可實(shí)現(xiàn)基于病癥的多項(xiàng)目聯(lián)檢，特別適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場(chǎng)等現(xiàn)場(chǎng)快檢應(yīng)用場(chǎng)景。無(wú)論是豬瘟、藍(lán)耳、牛鼻支、牛腹瀉等畜禽類傳染性疾病都可利用巧亦捷核酸一體機(jī)進(jìn)行準(zhǔn)確診斷。寵物PCR技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測(cè)的應(yīng)用

無(wú)論是由病毒、細(xì)菌，還是原蟲、寄生蟲等引起的犬貓傳染性疾病都可利用巧亦捷核酸一體機(jī)進(jìn)行診斷。即使存在于患犬或患貓?bào)w內(nèi)極少量的病原微生物，巧亦捷核酸一體機(jī)采用的PCR技術(shù)也能對(duì)病原微生物進(jìn)行上百萬(wàn)倍的復(fù)制，從而達(dá)到可以被檢出的濃度，因此巧亦捷核酸一體機(jī)能對(duì)犬貓傳染病進(jìn)行準(zhǔn)確、高效的診。例如貓鼻氣管炎是由貓皰疹病毒引起的一類貓上呼吸道疾病，當(dāng)貓傳染皰疹病毒后，會(huì)表現(xiàn)出一系列的上呼吸道癥狀，但臨床尚未有成熟的快速檢測(cè)方法，用巧亦捷核酸一體機(jī)則可以快速準(zhǔn)確的得出結(jié)果。江蘇PCR熒光檢測(cè)傳染病診斷也類似于刑偵，就是在患者的樣本中查找引起癥狀的元兇——病原微生物。

巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)能“穩(wěn)、準(zhǔn)、快”的檢測(cè)出禽病。以犬瘟為例，CDV經(jīng)由鼻、咽和上呼吸道侵入機(jī)體后首先在其附近的淋巴結(jié)和扁挑體中增殖，動(dòng)物表現(xiàn)為ZUI初的體溫升高和白細(xì)胞減少(主要是淋巴細(xì)胞減少)。傳染第、一周會(huì)出現(xiàn)病毒血癥，通過血液循環(huán)，CDV散布到全身的淋巴器1官、骨髓和上皮結(jié)構(gòu)的固有膜，身體的所有分泌物中開始向外排毒。因此在病毒傳染初期是無(wú)法在眼鼻分泌物中采集到病毒的，即便有少量病毒存在，膠體金試紙板也很難檢測(cè)出正確的結(jié)果。這是由于膠體金試紙板上包被的抗體需要和特異抗原結(jié)合后再和預(yù)先包被的二抗結(jié)合才能顯示結(jié)果，這其中需要的抗原（病毒）量較多。而PCR檢測(cè)是將抗原進(jìn)行擴(kuò)增，只要存在抗原就可以通過特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，可見到預(yù)期大小的DNA條帶出現(xiàn)，從而對(duì)病原體的基因組片段作出鑒定。因此，我們更推薦獸醫(yī)師們使用巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)。

巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：1）、靈敏度高，顯1著縮短窗口期，解決了潛伏期檢測(cè)不出的問題。由于PCR的檢測(cè)域遠(yuǎn)比測(cè)試紙廣，在機(jī)體帶毒的早期階段（潛伏期），雖然病毒快速繁殖，但是測(cè)試卡卻無(wú)法檢出，巧亦捷核酸一體機(jī)就不存在潛伏期檢測(cè)不出的問題；2）、特異性好:巧亦捷使用熒光探針技術(shù)，幾乎沒有方法學(xué)的假陽(yáng)性；可直接揭示病原體的存在；3）、檢測(cè)所需樣本量少：只要少量的血液（0.2cc），少量的口鼻分泌物，就可以做出多個(gè)疾病項(xiàng)目；4）、用于體檢篩查：特別是體弱或者老年動(dòng)物，定期的體檢篩查顯得格外的重要，使用巧亦捷核酸一體機(jī)可協(xié)助醫(yī)師早期發(fā)現(xiàn)疾病，把疾病消滅在早期階段，延長(zhǎng)寵物的壽命，從而提高從寵物福利；5）、用于鑒別診斷：當(dāng)臨床上出現(xiàn)類似癥狀的疾病時(shí)，核酸一體機(jī)可協(xié)助醫(yī)師做出準(zhǔn)確的診斷，提高臨床的診斷率和治、愈率。無(wú)論是由病毒、細(xì)菌，還是原蟲、寄生蟲等引起的犬貓傳染性疾病都可利用巧亦捷核酸一體機(jī)進(jìn)行診斷。

巧亦捷核酸一體機(jī)采用的TaqMan探針法介紹：TaqMan探針法是具有高度特異性的定量PCR技術(shù)。它的工作原理是在PCR反應(yīng)體系中存在一對(duì)PCR引物和一條探針，探針的5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)，探針只與模板特異結(jié)合，其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時(shí)候，報(bào)告基團(tuán)的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收，所以儀器搜集不到信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)展，Taq酶遇到探針，利用3′→5′外切核酸酶的活性把探針切斷，導(dǎo)致報(bào)告基團(tuán)的熒光能量不能被淬滅基團(tuán)吸收，產(chǎn)生了熒光信號(hào)，因此信號(hào)的強(qiáng)度就代、表了模板DNA的拷貝數(shù)。巧亦捷核算檢測(cè)一體機(jī)從樣本處理開始，所有檢測(cè)項(xiàng)目可在30-60分鐘完成，自動(dòng)生成報(bào)告，檢測(cè)效率極大提高。寵物PCR技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測(cè)的應(yīng)用

巧亦捷以薄膜微流控技術(shù)為依托，實(shí)現(xiàn)分子診斷在臨床應(yīng)用端的場(chǎng)景邊界的拓展創(chuàng)新。寵物PCR技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測(cè)的應(yīng)用

巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針法熒光PCR與常規(guī)PCR的不同之處在于：在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針（探針本身具有熒光標(biāo)記），該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計(jì)因此只能與待檢測(cè)序列結(jié)合，與染料法相比提高了實(shí)驗(yàn)的特異性。目前市場(chǎng)上的探針主要種類有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu)：長(zhǎng)度與普通PCR引物類似，大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個(gè)熒光基團(tuán)，5’的熒光基團(tuán)稱為報(bào)告基團(tuán)（Report），3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)（Quencher）。TaqMan探針的性能：在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長(zhǎng)激發(fā)報(bào)告基團(tuán)，由于報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近，因此報(bào)告基團(tuán)能夠通過FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán)，使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量，而報(bào)告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。寵物PCR技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測(cè)的應(yīng)用