動(dòng)物用PCR豬病診斷

大多數(shù)寵物醫(yī)院運(yùn)用的診斷方法為：PCR和試紙條。其區(qū)別是：試紙條原理是基于抗體抗原的免疫學(xué)方法，通過(guò)顏色或熒光標(biāo)記來(lái)判讀，和PCR檢測(cè)是基于不同方法學(xué)的檢測(cè)方式。PCR通過(guò)檢測(cè)樣本中有無(wú)病毒DNA（RNA）來(lái)確診，靈敏度高、特異性強(qiáng)、支持檢測(cè)項(xiàng)目多，是人醫(yī)醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，兩者區(qū)別可以理解為滴血認(rèn)親（免疫學(xué)方法）與親子鑒定（分子診斷）的區(qū)別。目前專業(yè)的的寵物疾病機(jī)構(gòu)就是使用PCR檢測(cè)。巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用國(guó)際**的薄膜微流控技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了從核酸提取、PCR擴(kuò)增、熒光檢測(cè)全流程自動(dòng)化芯片內(nèi)完成，可以實(shí)現(xiàn)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的核酸檢測(cè)，且檢測(cè)時(shí)間短，全程無(wú)需專業(yè)技術(shù)人員參與，可實(shí)現(xiàn)基于病癥的多項(xiàng)目聯(lián)檢，更適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場(chǎng)等現(xiàn)場(chǎng)快檢應(yīng)用場(chǎng)景。微流控PCR技術(shù)是一種通過(guò)將PCR反應(yīng)微型化來(lái)實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的高通量、低成本和快速的方法。動(dòng)物用PCR豬病診斷

巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針?lè)晒釶CR與常規(guī)PCR的不同之處在于：在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針（探針本身具有熒光標(biāo)記），該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計(jì)因此只能與待檢測(cè)序列結(jié)合，與染料法相比提高了實(shí)驗(yàn)的特異性。目前市場(chǎng)上的探針主要種類有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu)：長(zhǎng)度與普通PCR引物類似，大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個(gè)熒光基團(tuán)，5’的熒光基團(tuán)稱為報(bào)告基團(tuán)（Report），3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)（Quencher）。TaqMan探針的性能：在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長(zhǎng)激發(fā)報(bào)告基團(tuán)，由于報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近，因此報(bào)告基團(tuán)能夠通過(guò)FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán)，使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量，而報(bào)告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。蘇州核酸PCR儀器生產(chǎn)企業(yè)巧亦捷利用了先進(jìn)的薄膜微流控技術(shù)和qPCR核酸檢測(cè)技術(shù)。

傳統(tǒng)PCR檢測(cè)系統(tǒng)常見(jiàn)的痛點(diǎn)：“一是“繁”，即操作繁瑣，需要手動(dòng)進(jìn)行核損提取、純化；二是“?！?，即需要專業(yè)操作人員和**的操作臺(tái)，耗費(fèi)人力、物力；三是“污”，即因PCR系統(tǒng)靈敏性和特異性高，人員操作，容易污染，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)。四是“半”，即市面上幾乎所有的PCR儀都是半自動(dòng)?！庇谑敲闇?zhǔn)這一痛點(diǎn)，巧亦捷快速核酸檢測(cè)一體機(jī)正式面世。相較于傳統(tǒng)PCR檢測(cè)系統(tǒng)，我們擁有三大特色：一是全自動(dòng)：自動(dòng)完成繁瑣的核酸提取+PCR擴(kuò)增，全自動(dòng)核酸提取，手工操作時(shí)間少于1分鐘，至少節(jié)省一個(gè)專業(yè)操作人員。二是全封閉：避免人為干擾，消除人和實(shí)驗(yàn)室的污染，降低對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的高要求。三是可檢測(cè)：貓皰疹病毒、貓杯狀病毒、貓冠狀病毒、貓瘟熱病毒、犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒等多種病原體。

PCR(PolymeraseChainReaction)是一種復(fù)制核酸片段并提高DNA產(chǎn)量的技術(shù)，即所謂的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，這種技術(shù)可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)大量復(fù)制特定的基因片段。由于其高敏感性和高特異性的特點(diǎn)，PCR技術(shù)被應(yīng)用在寵物疾病分子的診斷上，將從疑似患病寵物（血液、眼鼻分泌物、糞便，尿液或腹水）中采樣的極微量病原(細(xì)菌、病毒或寄生蟲)特定核酸片段樣本，透過(guò)PCR的方式大量被復(fù)制，再以核酸電泳的方式判讀結(jié)果，從而獲得早期、快速、穩(wěn)定和準(zhǔn)確的診斷結(jié)果.許多寵物醫(yī)生表示自己在工作中已經(jīng)離不開(kāi)PCR儀的幫助了。

樣本處理、核酸提取、PCR擴(kuò)增和數(shù)據(jù)處理是PCR的四個(gè)步驟。其中核酸提取可以幫助研究人員準(zhǔn)確地快速地分離細(xì)胞或分子材料中的有效核酸，并獲得足夠的樣本為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。無(wú)論是病毒、細(xì)菌還是體細(xì)胞，遺傳物質(zhì)都不是裸露在細(xì)胞外，都是在細(xì)胞內(nèi)。需要有一個(gè)核酸提取試劑將遺傳物質(zhì)釋放到外界，保證PCR反應(yīng)效率。將核酸釋放出來(lái)后，提取與純化過(guò)程中同樣需要將樣本中的一些PCR抑制物去除掉，獲得純度比較高的核酸，比較大限度的保證PCR反應(yīng)中抑制物的濃度降低，提高核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性。因此核酸提取與純化這一步，也是保證PCR反應(yīng)結(jié)果的關(guān)鍵一步。巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用磁珠法提取，效率高且可確保結(jié)果更準(zhǔn)確。巧亦捷核算檢測(cè)一體機(jī)從樣本處理開(kāi)始，所有檢測(cè)項(xiàng)目可在30-60分鐘完成，自動(dòng)生成報(bào)告，檢測(cè)效率極大提高。江蘇分子檢測(cè)PCR試劑

巧亦捷全自動(dòng)核酸一體機(jī)無(wú)需專業(yè)檢測(cè)人員，儀器上樣簡(jiǎn)便，軟件操作易于掌握。動(dòng)物用PCR豬病診斷

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）的作用下，由一對(duì)特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng)，三個(gè)不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在反應(yīng)體系內(nèi)，以一對(duì)人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物，第一步，模板DNA變性，以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物，目的基因作為模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過(guò)80-90℃高溫變性，使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步，模板DNA與引物退火（復(fù)性），模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃，引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對(duì)。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈。這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán)，2-4分鐘即可完成一個(gè)循環(huán)，2-3小時(shí)就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬(wàn)倍，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的放大。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制，因此PCR反應(yīng)具有高度特異性。動(dòng)物用PCR豬病診斷