動(dòng)物用PCR檢測(cè)方法

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）的作用下，由一對(duì)特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng)，三個(gè)不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在反應(yīng)體系內(nèi)，以一對(duì)人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物，第一步，模板DNA變性，以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物，目的基因作為模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過80-90℃高溫變性，使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步，模板DNA與引物退火（復(fù)性），模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃，引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對(duì)。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈。這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán)，2-4分鐘即可完成一個(gè)循環(huán)，2-3小時(shí)就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬倍，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的放大。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制，因此PCR反應(yīng)具有高度特異性。在準(zhǔn)確的前提下，高效顯得尤為重要。動(dòng)物用PCR檢測(cè)方法

寵物在疾病傳染的初期，臨床病癥并不明顯，病原的數(shù)量還不足以讓檢測(cè)板或血液抹片鏡檢兩種方式觀察到。目前市場(chǎng)上的一些檢測(cè)工具主要檢測(cè)寵物體內(nèi)是否產(chǎn)生對(duì)抗某種病原的抗體，雖然快速，但在初期傳染時(shí)，寵物免疫系統(tǒng)尚未產(chǎn)生抗體，所以檢測(cè)出現(xiàn)偽陰性，進(jìn)而延誤診療。巧亦捷PCR檢測(cè)試劑檢測(cè)靈敏度高；且可以消除細(xì)菌性疾病原菌假陽性的可能?？蓱?yīng)用于犬瘟、犬細(xì)小病毒、弓形蟲等寵物致病菌的檢測(cè)，從根本上突破了免疫學(xué)間接檢測(cè)的局限。動(dòng)物用PCR檢測(cè)方法微流控PCR技術(shù)是一種通過將PCR反應(yīng)微型化來實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的高通量、低成本和快速的方法。

巧亦捷全自動(dòng)薄膜微流控核酸檢測(cè)儀器擁有多種重技術(shù)，保障結(jié)果準(zhǔn)確：其采用Taqman熒光探針和經(jīng)典PCR擴(kuò)增技術(shù)，能夠?qū)⑸飿?biāo)志物精確定量，同時(shí)輸出Ct值和擴(kuò)增曲線，結(jié)果判讀簡(jiǎn)潔明了；質(zhì)控更全1面，結(jié)果更可靠，設(shè)備體積小巧，便于搬運(yùn)和攜帶，可在多種場(chǎng)景下隨心使用，且薄膜微流控芯片為封閉系統(tǒng)操作，可很大程度避免人為和環(huán)境的污染，降低對(duì)檢測(cè)環(huán)境的要求，以及對(duì)檢測(cè)人員的要求。更適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場(chǎng)等多種使用場(chǎng)景。

使用平常的抗原試紙做動(dòng)物診斷常會(huì)出現(xiàn)誤診的情況，如用抗原試紙條對(duì)剛買的小狗帶到做檢測(cè)，犬瘟試紙條檢測(cè)是陰性，但回家養(yǎng)幾天后小狗開始出現(xiàn)打噴嚏、咳嗽等癥狀，此時(shí)再去做檢查，犬瘟檢測(cè)則變成陽性，這種情況在寵物臨床上并不少見。很有可能這只小狗在第、一次檢查的時(shí)候已經(jīng)傳染并且向外排毒了，但是由于抗原滴度低排毒量比較小，試紙條檢測(cè)不出來，錯(cuò)失了及早診療的機(jī)會(huì)。另一方面，抗體檢測(cè)試紙并不能及時(shí)準(zhǔn)確知道機(jī)體是否傳染這個(gè)病原，就比如現(xiàn)在常見的貓咪弓形蟲檢測(cè)，只有貓咪接觸病原一段時(shí)間后，才能產(chǎn)生足量的抗體，抗體試紙才出現(xiàn)陽性結(jié)果。當(dāng)這些情況發(fā)生，結(jié)果都是令人很難過的。因?yàn)檫@不僅*意味著后期要花更多的Money用于診療，還會(huì)出現(xiàn)診療困難，毛孩子們受罪，甚至?xí)霈F(xiàn)我們都不愿意接受的死亡。所以我們更建議使用PCR技術(shù)進(jìn)行臨床診斷。巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)操作非常簡(jiǎn)單，只需要放入樣本就可以了，不需要手工進(jìn)行核酸提取，也避免了樣本污染。

巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)能“穩(wěn)、準(zhǔn)、快”的檢測(cè)出禽病。以犬瘟為例，CDV經(jīng)由鼻、咽和上呼吸道侵入機(jī)體后首先在其附近的淋巴結(jié)和扁挑體中增殖，動(dòng)物表現(xiàn)為ZUI初的體溫升高和白細(xì)胞減少(主要是淋巴細(xì)胞減少)。傳染第、一周會(huì)出現(xiàn)病毒血癥，通過血液循環(huán)，CDV散布到全身的淋巴器1官、骨髓和上皮結(jié)構(gòu)的固有膜，身體的所有分泌物中開始向外排毒。因此在病毒傳染初期是無法在眼鼻分泌物中采集到病毒的，即便有少量病毒存在，膠體金試紙板也很難檢測(cè)出正確的結(jié)果。這是由于膠體金試紙板上包被的抗體需要和特異抗原結(jié)合后再和預(yù)先包被的二抗結(jié)合才能顯示結(jié)果，這其中需要的抗原（病毒）量較多。而PCR檢測(cè)是將抗原進(jìn)行擴(kuò)增，只要存在抗原就可以通過特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，可見到預(yù)期大小的DNA條帶出現(xiàn)，從而對(duì)病原體的基因組片段作出鑒定。因此，我們更推薦獸醫(yī)師們使用巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)。分子診斷技術(shù)大致劃分為PCR技術(shù)、分子雜交、基因測(cè)序、核酸質(zhì)譜、生物芯片5大類。蘇州全自動(dòng)PCR技術(shù)

巧亦捷核算檢測(cè)一體機(jī)從樣本處理開始，所有檢測(cè)項(xiàng)目可在30-60分鐘完成，自動(dòng)生成報(bào)告，檢測(cè)效率極大提高。動(dòng)物用PCR檢測(cè)方法

在寵物醫(yī)院，往往沒有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境與PCR分區(qū)，樣本中病原體污染、PCR反應(yīng)后產(chǎn)物污染都是會(huì)很影響PCR結(jié)果，導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)，其中PCR產(chǎn)物污染是導(dǎo)致化驗(yàn)室環(huán)境污染**主要的因素（PCR反應(yīng)中DNA的復(fù)制是指數(shù)級(jí)的增長(zhǎng)）。而選擇不善于處理低濃度樣本與復(fù)雜樣本的提取方法，導(dǎo)致核酸提取不完全或者在**1后PCR反應(yīng)中存在抑制物，污染PCR反應(yīng)，則會(huì)導(dǎo)致漏檢，產(chǎn)生假陰性。這些都是在核酸檢測(cè)過程中需要注意的點(diǎn)。巧亦捷PCR反應(yīng)系統(tǒng)采用磁珠法核酸提取純化加熒光探針PCR方法，整機(jī)一體化，實(shí)現(xiàn)一機(jī)提取加擴(kuò)增，減少人工操作與培訓(xùn)時(shí)間，輕松上手。避免污染。動(dòng)物用PCR檢測(cè)方法