動物用PCR檢測方法

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）的作用下，由一對特異性引物經熱變性-退火-延伸反應，三個不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴增到多量的一種體外DNA擴增技術。在反應體系內，以一對人工合成的寡核苷酸作為擴增引物，第一步，模板DNA變性，以構成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物，目的基因作為模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA經過80-90℃高溫變性，使模板DNA雙鏈經PCR擴增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步，模板DNA與引物退火（復性），模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃，引物與模板DNA單鏈互補配對。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物結合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP為反應原料半保留復制合成一條新的模板DNA鏈。這三個步驟為一個循環(huán)，2-4分鐘即可完成一個循環(huán)，2-3小時就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復制到幾百萬倍，從而實現對靶DNA的放大。由于擴增堿基序列按照靶DNA復制，因此PCR反應具有高度特異性。在準確的前提下，高效顯得尤為重要。動物用PCR檢測方法

寵物在疾病傳染的初期，臨床病癥并不明顯，病原的數量還不足以讓檢測板或血液抹片鏡檢兩種方式觀察到。目前市場上的一些檢測工具主要檢測寵物體內是否產生對抗某種病原的抗體，雖然快速，但在初期傳染時，寵物免疫系統尚未產生抗體，所以檢測出現偽陰性，進而延誤診療。巧亦捷PCR檢測試劑檢測靈敏度高；且可以消除細菌性疾病原菌假陽性的可能?？蓱糜谌痢⑷毿〔《?、弓形蟲等寵物致病菌的檢測，從根本上突破了免疫學間接檢測的局限。動物用PCR檢測方法微流控PCR技術是一種通過將PCR反應微型化來實現PCR反應的高通量、低成本和快速的方法。

巧亦捷全自動薄膜微流控核酸檢測儀器擁有多種重技術，保障結果準確：其采用Taqman熒光探針和經典PCR擴增技術，能夠將生物標志物精確定量，同時輸出Ct值和擴增曲線，結果判讀簡潔明了；質控更全1面，結果更可靠，設備體積小巧，便于搬運和攜帶，可在多種場景下隨心使用，且薄膜微流控芯片為封閉系統操作，可很大程度避免人為和環(huán)境的污染，降低對檢測環(huán)境的要求，以及對檢測人員的要求。更適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場等多種使用場景。

使用平常的抗原試紙做動物診斷常會出現誤診的情況，如用抗原試紙條對剛買的小狗帶到做檢測，犬瘟試紙條檢測是陰性，但回家養(yǎng)幾天后小狗開始出現打噴嚏、咳嗽等癥狀，此時再去做檢查，犬瘟檢測則變成陽性，這種情況在寵物臨床上并不少見。很有可能這只小狗在第、一次檢查的時候已經傳染并且向外排毒了，但是由于抗原滴度低排毒量比較小，試紙條檢測不出來，錯失了及早診療的機會。另一方面，抗體檢測試紙并不能及時準確知道機體是否傳染這個病原，就比如現在常見的貓咪弓形蟲檢測，只有貓咪接觸病原一段時間后，才能產生足量的抗體，抗體試紙才出現陽性結果。當這些情況發(fā)生，結果都是令人很難過的。因為這不僅*意味著后期要花更多的Money用于診療，還會出現診療困難，毛孩子們受罪，甚至會出現我們都不愿意接受的死亡。所以我們更建議使用PCR技術進行臨床診斷。巧亦捷核酸檢測一體機操作非常簡單，只需要放入樣本就可以了，不需要手工進行核酸提取，也避免了樣本污染。

巧亦捷核酸檢測一體機能“穩(wěn)、準、快”的檢測出禽病。以犬瘟為例，CDV經由鼻、咽和上呼吸道侵入機體后首先在其附近的淋巴結和扁挑體中增殖，動物表現為ZUI初的體溫升高和白細胞減少(主要是淋巴細胞減少)。傳染第、一周會出現病毒血癥，通過血液循環(huán)，CDV散布到全身的淋巴器1官、骨髓和上皮結構的固有膜，身體的所有分泌物中開始向外排毒。因此在病毒傳染初期是無法在眼鼻分泌物中采集到病毒的，即便有少量病毒存在，膠體金試紙板也很難檢測出正確的結果。這是由于膠體金試紙板上包被的抗體需要和特異抗原結合后再和預先包被的二抗結合才能顯示結果，這其中需要的抗原（病毒）量較多。而PCR檢測是將抗原進行擴增，只要存在抗原就可以通過特異性引物進行擴增，產物經瓊脂糖凝膠電泳，可見到預期大小的DNA條帶出現，從而對病原體的基因組片段作出鑒定。因此，我們更推薦獸醫(yī)師們使用巧亦捷核酸檢測一體機。分子診斷技術大致劃分為PCR技術、分子雜交、基因測序、核酸質譜、生物芯片5大類。蘇州全自動PCR技術

巧亦捷核算檢測一體機從樣本處理開始，所有檢測項目可在30-60分鐘完成，自動生成報告，檢測效率極大提高。動物用PCR檢測方法

在寵物醫(yī)院，往往沒有專業(yè)的實驗環(huán)境與PCR分區(qū)，樣本中病原體污染、PCR反應后產物污染都是會很影響PCR結果，導致假陽性的出現，其中PCR產物污染是導致化驗室環(huán)境污染**主要的因素（PCR反應中DNA的復制是指數級的增長）。而選擇不善于處理低濃度樣本與復雜樣本的提取方法，導致核酸提取不完全或者在**1后PCR反應中存在抑制物，污染PCR反應，則會導致漏檢，產生假陰性。這些都是在核酸檢測過程中需要注意的點。巧亦捷PCR反應系統采用磁珠法核酸提取純化加熒光探針PCR方法，整機一體化，實現一機提取加擴增，減少人工操作與培訓時間，輕松上手。避免污染。動物用PCR檢測方法