Micro Drop蛋白質(zhì)檢測(cè)功能:
Protein Bradford檢測(cè)方式:
Bradford是常用的蛋白定量檢測(cè)的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測(cè)。與其他比色法一樣,Bradford法檢測(cè)蛋白濃度時(shí)必須構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Bradford法是根據(jù)蛋白質(zhì)在酸性溶液中,能夠使考馬斯亮藍(lán)結(jié)合,使得染料的比較大吸收峰值變更為595nm來(lái)檢測(cè)蛋白濃度。檢測(cè)蛋白-染料復(fù)合物在595nm處的吸光值,并在750nm處做基線校正,計(jì)算得出蛋白的濃度。
常規(guī)檢測(cè)使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1,檢測(cè)濃度范圍為0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比較好線性濃度范圍在0.01-1mg/ml。當(dāng)使用基座檢測(cè)時(shí),推薦使用4μl樣品和200μl Bradford試劑。
微量檢測(cè)使用試劑/樣品的體積比為1:1,可以檢測(cè)蛋白濃度范圍從15ug/ml至125ug/ml。要準(zhǔn)備足夠的樣品來(lái)做基座檢測(cè),建議使用10μl樣品和10μlBCA試劑(使用PCR管)。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說(shuō)明來(lái)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和和構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保在所有檢測(cè)過(guò)程中,每個(gè)樣品的處理時(shí)間及環(huán)境溫度一致。
A260/A280:是核酸純度的指示值。上海全光譜波長(zhǎng)超微量分光光度計(jì)
Micro Drop基座檢測(cè)空白循環(huán):
我們建議把空白對(duì)照當(dāng)成樣品來(lái)檢測(cè),這樣可以確認(rèn)儀器性能完好并且基座上沒(méi)有樣品殘留,按下列操作來(lái)運(yùn)行空白循環(huán):
1. 軟件中打開將進(jìn)行的操作模式,把空白對(duì)照加到基座上,并把樣品臂放下。
2. 點(diǎn)擊空白檢測(cè)來(lái)進(jìn)行空白對(duì)照檢測(cè)并保存參比圖譜。
3. 重新加空白對(duì)照到基座上,把它當(dāng)成樣品一樣來(lái)檢測(cè),點(diǎn)擊檢測(cè),結(jié)果應(yīng)該是差不多為一水平線,吸光
值變化應(yīng)不超過(guò)0.04A(10mm光程)。
4. 擦去上下基座上的液體,重新進(jìn)行上面的操作,直到檢測(cè)光譜圖的變化不超過(guò)0.04A(10mm光程)。
雖然不需要在每個(gè)樣品之間進(jìn)行空白檢測(cè),但我們建議在檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí),比較好每30min進(jìn)行一次空白檢測(cè)。
江西操作簡(jiǎn)便超微量分光光度計(jì)核酸檢測(cè)Micro Drop為一款全波長(zhǎng)(185~910nm)超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測(cè)功能:
Protein Lowry檢測(cè)方式:
Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應(yīng)形成銅-蛋白復(fù)合物。Folin-Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復(fù)合物,產(chǎn)生與蛋白量成比例的藍(lán)色產(chǎn)物。檢測(cè)該藍(lán)色產(chǎn)物在650nm處的吸光值,并在405nm處做基線校正,計(jì)算得出蛋白的濃度。試驗(yàn)中使用的試劑可以從多個(gè)廠家購(gòu)買。與其他比色法一樣,Lowry法進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)前也需要構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
推薦使用20μl的蛋白樣品和100μl Lowry試劑來(lái)做反應(yīng)。在Micro Drop上可以檢測(cè)的樣品濃度范圍為0.20mg/ml到4mg/ml。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說(shuō)明來(lái)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和和構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保在所有檢測(cè)過(guò)程中,每個(gè)樣品的處理時(shí)間及環(huán)境溫度一致??梢詮脑噭┖猩a(chǎn)廠家購(gòu)買用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(BSA)。
比色皿的正確使用方法 在使用比色皿時(shí),兩個(gè)透光面要完全平行,并垂直置于比色皿架中,以保證在測(cè)量時(shí),進(jìn)射光垂直于透光面,避免光的反射損失,保證光程固定。 比色皿有方向性。有些比色皿上標(biāo)有方向標(biāo)記,無(wú)方向標(biāo)記的比色皿應(yīng)予以校正,校正時(shí)要先確定方向并作好標(biāo)記,以減少測(cè)定誤差。比色皿的校正方法是:將純凈的蒸餾水注入比色皿中,把其中吸收*小的比色皿的吸光度置為零,并以此為基準(zhǔn),測(cè)出其它比色皿的相對(duì)吸光度。同一組比色皿相互間的差異應(yīng)小于測(cè)定誤差在測(cè)定同一溶液時(shí),吸光度差值應(yīng)小于0.5%,否則應(yīng)對(duì)差值進(jìn)行校正。
熒光分光光度計(jì)有兩個(gè)單色器,而一般紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)只有一個(gè)單色器。
寶予德超微量分光光度計(jì)使用時(shí)注意小貼士:
(1)測(cè)量前將樣品中度混勻(可采用震蕩器或用手指彈震管底)
(2)移液器吸頭插入液面下吸取樣品,可避免吸入氣泡;TIP頭貼著下光纖表面打出樣品,且只按到移液器***擋盡頭,第二擋不要按,可以避免吹出氣泡到樣品中。
(3)每次測(cè)量完畢后,用蒸餾水清潔上下光纖端面,這樣可以更好地保證下一次測(cè)量的準(zhǔn)確性(主要針對(duì)超高濃度樣品,一般樣品無(wú)此要求)。
(4)每次做空白檢測(cè)前一定要先用水清潔上下光纖表面,可保證空白檢測(cè)準(zhǔn)確。
(5)每次測(cè)量的核酸樣品量建議為1-2微升,蛋白樣品建議2微升。 過(guò)少可能無(wú)法形成水柱,過(guò)多可能溢出。
(6)加樣后盡快測(cè)量,以防蒸發(fā)濃縮以及灰塵落入,已加樣品不能多次檢測(cè),如需重測(cè)需重新滴加同一樣品。
(7)儀器避免陽(yáng)光直射,避免強(qiáng)風(fēng)吹拂,以避免蒸發(fā)。
(8)連續(xù)測(cè)量一段時(shí)間后擦凈樣品,用水清潔上下光纖表面,然后用水或緩沖液進(jìn)行重新空白后再檢測(cè)。
(9)清潔光纖端面(上樣基座)時(shí)必須用潔凈質(zhì)軟的實(shí)驗(yàn)室用紙(擦鏡紙等)進(jìn)行輕輕擦拭。
超微量分光光度計(jì)已成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。安徽高靈敏度超微量分光光度計(jì)廠家直銷
寶予德MicroDrop超微量分光光度計(jì)既可使用超微量基座,也可使用常規(guī)比色皿檢測(cè)。上海全光譜波長(zhǎng)超微量分光光度計(jì)
朗伯一比爾(Lambert - Beer)定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理。當(dāng)一束單色光(指路由一種顏色的光)通過(guò)一均勻的溶液時(shí),一部分被吸收,一部分透過(guò)。
朗伯比爾定律:A = abc
其意義為:當(dāng)一束單色光通過(guò)一均勻溶液時(shí),溶液對(duì)單色光的吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。
A =abc 中,吸光系數(shù)a,表征吸光物質(zhì)的 靈敏度。a值越大,靈敏度越高。如果濃度的單位為物質(zhì)的量濃度(單位為:mol/L),則吸光系數(shù)a可以寫成ε ,ε稱為摩爾吸光系數(shù)。
由上式可知,當(dāng)溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時(shí),吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時(shí),首先需要測(cè)定溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收情況(吸收光譜),從中確定比較大吸收波長(zhǎng) ,然后以此波長(zhǎng) 的光為光源(單色光),進(jìn)行吸光度A的測(cè)定,這是朗伯比爾定律用于定量分析的首要條件。
上海全光譜波長(zhǎng)超微量分光光度計(jì)
上海寶予德科學(xué)儀器有限公司位于上海市松江區(qū)新橋鎮(zhèn)莘磚公路258號(hào)40幢201室-1,交通便利,環(huán)境優(yōu)美,是一家生產(chǎn)型企業(yè)。公司是一家有限責(zé)任公司(自然)企業(yè),以誠(chéng)信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神、專業(yè)的管理團(tuán)隊(duì)、踏實(shí)的職工隊(duì)伍,努力為廣大用戶提供***的產(chǎn)品。公司業(yè)務(wù)涵蓋移液器,吸頭,酶標(biāo)儀,分光光度計(jì),價(jià)格合理,品質(zhì)有保證,深受廣大客戶的歡迎。寶予德自成立以來(lái),一直堅(jiān)持走正規(guī)化、專業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持。