1、細胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢?胰酶的作用是什么?胰酶是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時,細胞由于自身內部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點2、使用胎牛血清培養(yǎng)細胞,在使用胰酶消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程,這是什么原因?血清終止的原理其實是競爭抑制,就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結合,使胰酶失去消化細胞蛋白的機會。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,細胞還是成團的,這可能是什么原因導致的?①消化時間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲不當,或者使用了過期胰酶含EDTA的胰酶消化活力會比不含EDTA的強。EDTA胰酶價格對比
細胞培養(yǎng)胰蛋白酶生物制品簡介中文名稱:胰蛋白酶中文同義詞:胰蛋白酶;胰蛋白酶1:250(豬胰臟);胰蛋白酶1:300(豬胰臟);胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶類英文名稱:Trypsin英文同義詞:TRYPSIN;TRYPSIN,1-250;TRYPSIN,1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN,HUMANPANCREAS;TRYPSINPORCINE;TRYPSIN,PORCINEPANCREAS;CAS號:9002-07-7分子式:C6H15O12P3分子量:≈24000EINECS號:232-650-8胰蛋白酶物化性質胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取,純化獲得的結晶,再制成的凍干制劑。易溶于水,不溶于三氯甲烷、乙醇、**等有機溶劑。在,短時間煮沸幾乎不失活;在堿溶液中加熱則變性沉淀,Ca2+有保護和***作用,胰蛋白酶的等電點為。牛胰蛋白酶原有229個氨基酸組成,含6對二硫鍵,其氨基酸排列順序和晶體結構已被闡明。在腸激酶活自身催化下,酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解,釋放出來纈-天-天-天-天-賴6肽,生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個,分子量23800[2],活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。豬胰蛋白酶的化學結構與牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸殘基排列順序中,只有41個氨基酸殘基不同。EDTA胰酶價格對比消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的?
收藏查看我的收藏0有用+1已投票0胰蛋白酶編輯鎖定本詞條由“科普**”百科科學詞條編寫與應用工作項目審核。胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種,EC,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性**強的蛋白酶,在決定蛋白質的氨基酸排列中,它成為不可缺少的工具。中文名胰蛋白酶英文名Trypsin別稱胰酶化學式C6H15O12P3分子量≈24000CAS登錄號9002-07-7EINECS登錄號232-650-8[1]熔點115℃[1]水溶性易溶外觀白色或類白色目錄1生物制品簡介?物化性質2*典標準?來源含量?制法要求?性狀?鑒別?檢查?效價測定?制劑3胰蛋白酶的醫(yī)學檢查?檢查名稱?分類?胰蛋白酶的測定原理?試劑?操作方法?正常值?化驗結果臨床意義?附注?相關疾病4生物*品說明?*理作用?適應證?禁忌證?用法用量?注意事項?不良反應:?**點評5其他。
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細胞的提取、培養(yǎng),以及體外細胞培養(yǎng)過程中,均會使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細胞間蛋白質,使組織或細胞離散成單個細胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細胞間連接蛋白的水解,起到增強消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時呈紫紅色,偏酸性時呈橘紅色,近中性時呈粉紅色。本產品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無酚紅指示劑,經0.22μm過濾除菌。胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。
胰蛋白酶試劑同酶速率法測定。胰蛋白酶操作方法同酶速率法測定。胰蛋白酶正常值(1)RIA法:陰性。(2)酶速率法(37℃):十二指腸液:150~600μg/ml胰蛋白酶化驗結果臨床意義(1)升高:急性胰腺、慢性胰腺(復發(fā)期)、胰腺*、腎功能不全等。(2)降低:胰腺外分泌功能不全(慢性胰腺后期)。胰蛋白酶附注急性胰腺時血清胰蛋白酶可上升至正常人的2~400倍,一般在10~15天**正常。胰蛋白酶相關疾病急性胰腺、慢性胰腺、胰腺*[4]胰蛋白酶生物*品說明胰蛋白酶*理作用胰蛋白酶為肽鏈內切酶,對精氨酸和賴氨酸肽鏈具有選擇性水解作用,可使天然蛋白、變性蛋白、纖維蛋白和黏蛋白等水解為多肽或氨基酸。由于血清中含有非特異性抑肽酶,故胰蛋白酶不會消化正常**,而能分解黏痰、膿性痰等黏性分泌物,能促進***、化療*物向病灶滲透。胰蛋白酶適應證1.用于膿胸、血胸、外科癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、婁管等所產生的局部水腫、血腫、膿腫。2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和膿性痰。3.用于***毒蛇咬傷,曾試用于竹葉青、銀環(huán)蛇、眼鏡蛇、蝮蛇等毒蛇咬傷的各型病人800余例,均獲***。胰蛋白酶禁忌證1.肝腎出血、出血傾向及結核性膿腫患者禁用。2.不可用于急性癥及出血空腔中。胰酶細胞消化液具有方便快速的特點。山東進口胰酶常見問題
胰蛋白酶溶液作為細胞分離試劑廣泛應用于貼壁細胞的連續(xù)培養(yǎng)。EDTA胰酶價格對比
在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切段,水解細胞間的蛋白質,破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關,在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或對胰酶敏感的細胞常采用低濃度(0.05%)的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細胞連接促進細胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。EDTA胰酶價格對比