本發(fā)明屬于氨基酸生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域:,具體涉及一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基。背景技術(shù)::谷氨酸,是一種酸性氨基酸。分子內(nèi)含兩個羧基,化學名稱為α-氨基戊二酸。谷氨酸是里索遜1856年發(fā)現(xiàn)的,為無色晶體,有鮮味,微溶于水,而溶于鹽酸溶液,等電點。大量存在于谷類蛋白質(zhì)中,動物腦中含量也較多。谷氨酸在生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝過程中占重要地位,參與動物、植物和微生物中的許多重要化學反應。谷氨酸鈉俗稱味精,是重要的鮮味劑,對香味具有增強作用。谷氨酸鈉***用于食品調(diào)味劑,既可單獨使用,又能與其它氨基酸等并用。用于食品內(nèi),有增香作用。在食品中濃度為,每人每天允許攝入量為0-120微克/千克(以谷氨酸計)。在食品加工中一般用量為-。谷氨酸主要以微生物發(fā)酵制備而得,通過優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基,使得菌體增殖速率提高,可以提高氨基酸的產(chǎn)量?,F(xiàn)有技術(shù)對谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化進行了大量的研究,例如文獻1“基于pb試驗和響應面分析法對谷氨酸棒桿菌cnl021發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化,**釀造2014年”,通過**陡爬坡試驗和響應面分析法對發(fā)酵培養(yǎng)基組成進行優(yōu)化,得到谷氨酸棒桿菌**適發(fā)酵培養(yǎng)基組,較未優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)酸量提高了。無血清培養(yǎng)基適合于需要無血清環(huán)境的細胞系。廣西培養(yǎng)基報價
維持15-20分鐘,可殺滅所有的繁殖體和芽胞。本法適用于耐高溫、耐濕物品的**,如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。(二)下向主要介紹高壓蒸氣**器**效果的驗證方法高壓蒸氣**器使物品**后達到無菌要求,這是**實驗中的基本保證。高壓**器**效果是否合格足實驗成敗的**基礎(chǔ)**關(guān)鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,不需高壓**外,大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓**15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基**不徹底,直接關(guān)系到對**的無菌試驗結(jié)果。因此必須認真對高壓**器進行**效果的驗證。為此我們提供了進行**效果驗證的一個簡易可行的方法。1.試驗材料(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌,含芽胞量5-lO5CFU/片。(2)121℃壓力蒸氣**化學指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓**20分鐘后備用。(4)O—150℃留點溫度計。2.方法與結(jié)果將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片(以下簡稱菌片)用無菌鑷子放人密封試管中。化學指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓**器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如**器為二層,則需放10處。貴州DMEM/F12培養(yǎng)基采購RPMI1640培養(yǎng)基確保了細胞的高效生長。
無血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達到既能滿足動物細胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細胞貼壁生長,包括以下幾大類物質(zhì):1)促貼壁物質(zhì):一般為細胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉*細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。2)促生長因子及***:針對不同細胞添加不同的生長因子。***也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質(zhì),有些***是許多細胞必不可少的,如胰島素。3)酶**劑:培養(yǎng)貼壁生長的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中需含酶**劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。**常用的是大豆胰酶**劑。4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護細胞免受機械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。
在s3中,將s2中消毒的外植體接入誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng),誘導培養(yǎng)基的配方為ms+,誘導培養(yǎng)基的ph值為,在s4中,將s3中的無菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)基的配方為ms+~~,增殖培養(yǎng)基的ph值為,在s5中,將s4中的繡球組培苗放入生根培養(yǎng)基中,生根培養(yǎng)基的配方為1/2ms+~~,生根培養(yǎng)基ph值為。通過采用上述技術(shù)方案,通過液體**培養(yǎng)技術(shù),以芽為原材料,獲取方便,增殖倍率高達8~10倍,生根率達到95%以上,苗木規(guī)格整齊,性狀保持穩(wěn)定,同時節(jié)省成本,適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量繡球種苗。誘導培養(yǎng)基萌芽率能達到90%,可以成功建立無菌再生體系。使用本增殖培養(yǎng)基,繡球組培苗增殖倍率能夠達到8~10倍,組培苗高度一致,生長健壯。使用本生根培養(yǎng)基,繡球組培苗生根率能夠達到95%,根系發(fā)達,健壯,可以成功用于移栽大棚。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s3中,將s2中消毒的外植體接入誘導培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)6~8周。通過采用上述技術(shù)方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免誘導培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應激反應,植物材料能夠快速適應誘導培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基提供了純凈的細胞培養(yǎng)環(huán)境。
無芽孢:E=209—250*103J/mol。顯然,(5)式的比值〉1,說明提高溫度對于第二個平行反應,即菌體死亡的反應是有利的。提高溫度,雖然兩個平行性反應的反應速度常數(shù)都提高了,但是,達到同樣的**效果,所需要的時間卻縮短了,由于***個反應也就是營養(yǎng)成分破壞的反應速度常速增加的少,因此,有利于減少培養(yǎng)基在**過程中營養(yǎng)成分的破壞。換言之,高溫短時**對于培養(yǎng)基營養(yǎng)成分是有利的。通常所說的高溫短時**可以提高生產(chǎn)效益,其理論根據(jù)就在于此。結(jié)論1:當**溫度上升時,微生物殺死速率的提高要超過培養(yǎng)基成分的破壞速率的增加。要減少營養(yǎng)成分的破壞,可升高溫度**。結(jié)論2:在**時選擇較高的溫度、較短的時間,這樣便既可達到需要的**程度,同時又可減少營養(yǎng)物質(zhì)的損失。(二)、影響**效果的因素(1)微生物種類:不同的微生物k值不同。(2)初始菌量:在保持N值不變的前提下,t與初始菌量N0的對數(shù)成正比。(3)培養(yǎng)基成份:油脂、蛋白質(zhì)增加微生物的耐熱性。(4)傳熱與混合狀況:影響受熱均勻度。(5)培養(yǎng)基中固體顆粒的存在影響熱穿透。(6)蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和**溫度。(7)pH:酸性pH下可加快微生物熱死速率三、培養(yǎng)基的工業(yè)**。RPMI1640培養(yǎng)基能夠提高細胞的存活率。福建RPMI1640培養(yǎng)基價格對比
F12培養(yǎng)基在細胞分化研究中表現(xiàn)優(yōu)越。廣西培養(yǎng)基報價
將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導實驗;b、**消毒:于無菌環(huán)境下,將挑選的種子置于無菌三角瓶中,用無菌水清洗3-5次,75%酒精搖動清洗5min,無菌水清洗3-5次,5%naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s),清水洗3-5次,種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去。(2)配制誘導培養(yǎng)基:cs基本培養(yǎng)基+,用超純水溶解,。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。(3)愈傷**的誘導方法:用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導培養(yǎng)基,胚貼于培養(yǎng)基表面;于溫度24-26℃、濕度50-70%、光照強度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)cs誘導培養(yǎng)基的誘導結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導時,經(jīng)cs誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。對比培養(yǎng)例7:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例7,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導培養(yǎng)基的誘導結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導時,經(jīng)ms誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。廣西培養(yǎng)基報價