胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來(lái)分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過(guò)程它可以被看成一種簡(jiǎn)單的動(dòng)力學(xué)過(guò)程,它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì),然后這些留下的物質(zhì)可以用來(lái)維持細(xì)胞的高能量水平這種過(guò)程通過(guò)將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來(lái)發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子,通常有四種類(lèi)型,它們是肽酶,脂水解酶,載脂蛋白酶和糖水解酶,分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類(lèi)物質(zhì)分解為更小的離子和分子,以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì),維持其自身的正常功能和形態(tài)。EDTA是一種二價(jià)金屬離子螯合劑,用于結(jié)合抑制胰蛋白酶活性的鈣離子和鎂離子。安徽進(jìn)口胰酶供應(yīng)商
胰蛋白酶(Trypsin)簡(jiǎn)稱(chēng)胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng),以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色,偏酸性時(shí)呈橘紅色,近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無(wú)酚紅指示劑,經(jīng)0.22μm過(guò)濾除菌。甘肅胰酶常見(jiàn)問(wèn)題有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。
0.25%胰酶和加了EDTA胰酶區(qū)別是什么詳細(xì)說(shuō)明
細(xì)胞之間是通過(guò)CAM(細(xì)胞粘性分子)相連的,而很多粘性分子只有在有+2價(jià)金屬離子,如Ca2+,Mg2+,的存在下才能行使這種功能。EDTA是鈣離子的鰲合劑,在胰酶中加入EDTA的作用簡(jiǎn)單的說(shuō)就是為了增加胰酶的消化作用,尤其適用于比較難于消化的細(xì)胞;同時(shí)可以減少胰消化時(shí)間,以減少酶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。加入EDTA的消化反應(yīng)不能通過(guò)加入培養(yǎng)液終止,必須離心才能去除EDTA,所以要掌握好消化時(shí)間。
胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶(Trypsin)、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2+和Mg2+。該消化液已用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說(shuō)明:貼壁細(xì)胞的消化:1、吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅),略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái);此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液;加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運(yùn)輸。
先用少許**過(guò)的PBS調(diào)成糊狀,然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜,過(guò)濾**,分裝,4℃保存?zhèn)溆谩#?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱(chēng)取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(左右)調(diào)成糊狀,然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進(jìn)行過(guò)濾**,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆茫S脻舛葹榛?。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右。)一般**,至于作用效果,需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下,因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過(guò)夜,取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過(guò)夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō),四度放置過(guò)夜,給**生長(zhǎng)的機(jī)會(huì),盡管過(guò)濾可以出去**,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,考慮有:1、過(guò)期或是酶已經(jīng)部分變性2、溶液ph值不對(duì)3、在沒(méi)過(guò)濾之前的絮狀沉淀是正?,F(xiàn)象,因胰酶多取自動(dòng)物胰腺,沉淀為**塊。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異?天津胰酶進(jìn)口
通常室溫消化3-5分鐘就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。安徽進(jìn)口胰酶供應(yīng)商
只斷裂賴(lài)氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過(guò)程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**適pH值~。pH>。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈**。臨床用于抗消腫,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。胰蛋白酶*典標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶來(lái)源含量本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計(jì)算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。胰蛋白酶制法要求本品應(yīng)從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。胰蛋白酶性狀本品為白色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末。胰蛋白酶鑒別取本品約2mg,置白色點(diǎn)滴板上,加對(duì)甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽試液,即顯紫色。胰蛋白酶檢查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法測(cè)定(2010年版*典二部附錄ⅥH),pH值應(yīng)為~。溶液的澄清度取本品,加,依法檢查(2010年版*典二部附錄ⅨB),溶液應(yīng)澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制備取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(取,混合,pH值為)50ml,溫?zé)崾谷芙猓鋮s后再稀釋至刻度,搖勻。安徽進(jìn)口胰酶供應(yīng)商