1. 10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域,每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個點(diǎn)的直徑為55 μm,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個點(diǎn)都有一個barcode序列。10X Visium空間轉(zhuǎn)錄組的實驗主要分為兩部分:組織學(xué)板塊和組學(xué)板塊。組織學(xué)板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態(tài)學(xué)信息;組學(xué)板塊包括cDNA的合成、擴(kuò)增、接頭連接和測序,記錄切片的轉(zhuǎn)錄本信息和空間位置信息 。有很多其他類型的分析可用于空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù),包括基因模式的識別,空間區(qū)域的轉(zhuǎn)錄組定義等。河北歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組多少錢
什么是空間轉(zhuǎn)錄組?空間轉(zhuǎn)錄組是一種用于從空間層面上解析RNA-seq數(shù)據(jù)的技術(shù),從而解析單個組織切片中的所有mRNA。空間條形碼逆轉(zhuǎn)錄oligo(dT)引物在顯微鏡載玻片表面的有序附著,使得在mRNA樣品處理和后續(xù)測序過程中位置信息的編碼和獲取成為可能。單細(xì)胞RNA測序或組織樣本RNA測序,均無法為研究人員提供精確的空間信息。通過空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可獲取組織中具體的位置的轉(zhuǎn)錄信息,為研究和診斷提供有效數(shù)據(jù)支撐。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項目執(zhí)行經(jīng)驗,致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。山西空間轉(zhuǎn)錄組多少錢空間轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)在進(jìn)行 HE 染色的同時需要保證獲取組織基因表達(dá)信息。
空間轉(zhuǎn)錄組的一般流程。將準(zhǔn)備好的新鮮冷凍組織切片放置于空間轉(zhuǎn)錄組芯片上。每個細(xì)胞中的RNA分子都包含著基因表達(dá)的信息。組織切片成像,以檢索組織學(xué)信息。這樣就可以看到一個細(xì)胞或一組細(xì)胞在組織中的位置??臻g轉(zhuǎn)錄組芯片上含有上千個捕獲的spot,這些捕獲探針的 Poly-T 尾可以結(jié)合RNA分子的 Poly-A 尾。這些陣列的排列順序就像一個棋盤,帶有相同身份條形碼(barcode)的探測位于同一個正方形中。這樣就可以確定每個捕獲探針及其結(jié)合RNA的來源。組織切片固定。該芯片包含一個與組織切片一起成像的視覺可檢測框架。
10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的準(zhǔn)確性高嗎?下圖是一個將10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)應(yīng)用于小鼠海馬體研究的案例。A圖為腦組織切片的HE染色結(jié)果,從10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果中,可以清晰看到Tmsb4x(B圖)和Selenow(C圖)在海馬體區(qū)域高表達(dá),和已知的研究結(jié)果一致性較高。開展10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組需要做哪些準(zhǔn)備?空間轉(zhuǎn)錄組是一項十分前沿的技術(shù),涉及到很多細(xì)節(jié)方面的準(zhǔn)備工作,例如組織類型的選擇、前期預(yù)實驗的設(shè)計、病理區(qū)域的確認(rèn)等一系列內(nèi)容。而且實驗中存在很多不確定性因素,處理不慎容易導(dǎo)致整個項目失敗??臻g轉(zhuǎn)錄組組織學(xué)板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態(tài)學(xué)信息。
Visium空間轉(zhuǎn)錄組能夠做何種組織類型以及推薦切片厚度是什么?10X Genomics測試過很多組織類型,絕大多數(shù)都可以用于空間轉(zhuǎn)錄組的分析。下圖是他們官網(wǎng)上測試過的組織類型的列表,測試過的組織都可以運(yùn)用在空間轉(zhuǎn)錄組的分析上面。但建議用戶用基因表達(dá)玻片做正式實驗前,務(wù)必用組織優(yōu)化的玻片測試一下,看組織能否用于空間轉(zhuǎn)錄組的實驗,同時也找到比較好的組織通透時間。切片厚度基本上以10μm為主,但也有少量組織例外。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項目執(zhí)行經(jīng)驗,致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。10X Genomics 繼單細(xì)胞測序后也推出了空間轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)。重慶發(fā)展空間轉(zhuǎn)錄組
空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)和 10X Visium 依靠這種微陣列技術(shù),區(qū)別在于微陣列載玻片上的組織上的轉(zhuǎn)錄本信息。河北歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組多少錢
當(dāng)前的技術(shù)主要有四種策略:1、基于組學(xué)實驗結(jié)合空間重建的計算策略。這種計算方法可以充分利用內(nèi)在基因表達(dá)模式或共表達(dá)的趨勢,從單個細(xì)胞的大量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中重構(gòu)細(xì)胞間的環(huán)境。然而,這些推論方法在某些情況下*呈現(xiàn)空間趨勢或特定組織的總體布局。2、激光切割與NGS測序結(jié)合的策略?;贚CM的轉(zhuǎn)錄組學(xué)或基因組學(xué)成功地獲得了單個細(xì)胞的空間轉(zhuǎn)錄組,盡管其通量很低,但是在可以標(biāo)記成千上萬個單個細(xì)胞位置的多路復(fù)用條形碼策略可行之前,將少量細(xì)胞的數(shù)據(jù)粗略地整合到構(gòu)成***的巨大背景中,可能具有一定價值。3、基于熒光物質(zhì)原位的轉(zhuǎn)錄組學(xué)?;趫D像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué)在很大程度上增加了可檢測區(qū)域,但也存在一些問題,例如幾種smFISH方法很難從包括信號干擾、轉(zhuǎn)錄本積累等復(fù)雜背景中提取單個細(xì)胞。4、基于寡核苷酸的空間條碼加上NGS測序。費(fèi)用較高且無法在單個細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)錄組。河北歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組多少錢
上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司主要經(jīng)營范圍是醫(yī)藥健康,擁有一支專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊和良好的市場口碑。公司業(yè)務(wù)涵蓋科研服務(wù),科研檢測,學(xué)術(shù)研究,技術(shù)咨詢等,價格合理,品質(zhì)有保證。公司秉持誠信為本的經(jīng)營理念,在醫(yī)藥健康深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢,打造醫(yī)藥健康良好品牌。歐易生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實”的經(jīng)營理念,全力打造公司的重點(diǎn)競爭力。