母文庫實驗由歐易生物完成。2021年3月16日，寧波大學(xué)陳劍平院士、孫宗濤研究員為共同通訊作者，在PNAS雜志（IF:9.412）在線發(fā)表了題為“AclassofindependentlyevolvedtranscriptionalrepressorsinplantRNAvirusesfacilitatesviralinfectionandvectorfeeding”的研究論文，深入報道了在不同植物RNA病毒中一種***存在的、通過劫持茉莉酸信號途徑以協(xié)同促進病毒傳播和介體昆蟲攝食的新機制。植物病毒基因組通常*編碼少數(shù)幾個蛋白，它們必需依賴寄主植物才能完成自身的侵染和增殖。因此植物病毒往往通過其編碼的蛋白來劫持或者利用寄主因子來實現(xiàn)自身的復(fù)制，并在植物體內(nèi)傳播，產(chǎn)生系統(tǒng)性***。酵母膜系統(tǒng)文庫構(gòu)建與篩選技術(shù)。江蘇技術(shù)酵母文庫做什么
酵母雙雜交、GSTpull-down實驗顯示，SWC6可以直接與HY5、HYH相互作用（圖A-C）。pull-down實驗顯示ARP6同樣可以與HY5、HYH相互作用（圖D）。split-LUC、Co-IP實驗證實HY5可以與SWC6、ARP6結(jié)合（圖E-J）。下胚軸表型分析顯示，藍(lán)光下arp6hy5hyh三突變體下胚軸長度明顯大于arp6突變體、hy5hyh雙突變體，表明ARP6和HY5有可能通過不同途徑調(diào)控下胚軸的發(fā)育。Semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗顯示，藍(lán)光下，在 CRY1 存在下，SWC6 與 ARP6 的結(jié)合***增強。表明藍(lán)光***的 CRY1 可能通過藍(lán)光依賴的 CRY1-SWC6/ARP6 相互作用增強 SWC6 與 ARP6 的結(jié)合。安徽酵母文庫領(lǐng)域酵母文庫篩選研究多年建庫與篩選經(jīng)驗驗證。
酵母文庫實驗:本研究報道了 OsNF-YB9 和 OsNF-YB7 在水稻中呈現(xiàn)亞功能化。OsNF-YB7 主要在胚中表達，而 OsNF-YB9 主要在發(fā)育中的胚乳中表達。在擬南芥 lec1-1 中異源表達 OsNF-YB9 或 OsNF-YB7 可以彌補 lec1-1 缺陷。OsNF-YB9 功能缺失導(dǎo)致種子發(fā)育異常，種子變長、變窄、變薄，堊白率較高。此外，osnf-yb9 中淀粉合成相關(guān)基因的表達紊亂。OsNF-YB9 可以與主要在水稻胚乳中表達的蔗糖合酶蛋白激酶 SPK 相互作用。spk 敲除突變體種子與 osnf-yb9 突變體種子都表現(xiàn)出堊白增加的表型。OsNF-YB9 在水稻和擬南芥中的異位表達導(dǎo)致了種子變小。綜上表明，OsNF-YB9 在水稻種子發(fā)育中起到關(guān)鍵調(diào)控作用。
酵母單雜交篩選：（4）在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中，***GL1促進HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細(xì)胞中***表達，并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子，即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用，本研究中顯示HEK293T細(xì)胞中，***GL1過表達后，與LTR連接的螢火素酶表達上升近2倍，說明***GL1是一個轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是，文章的背景介紹內(nèi)容中，對應(yīng)用其他技術(shù)（如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等）對HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析，發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復(fù)制和潛伏期提供了見解，但并沒有直接評估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)（如Chip-seq、motif預(yù)測）進行了比較分析，發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對已識別因子的驗證率為30-60%，同等或優(yōu)于其他技術(shù)。文庫質(zhì)粒與酵母文庫載體重組。
酵母單雜交結(jié)果顯示，磷酸鹽饑餓響應(yīng)因子OsPHR1/2/3可以***51個目標(biāo)啟動子中的25個，包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以調(diào)控許多菌根共生相關(guān)基因的表達（圖A）。對叢枝菌根共生響應(yīng)基因啟動子序列預(yù)測分析顯示，有78個轉(zhuǎn)錄因子被富集，87%的菌根共生響應(yīng)基因受到OsPHR1/2/3的調(diào)控，其中42%受到OsPHR1/2/3的直接調(diào)控。因此推測OsPHR1/2/3可能是菌根共生調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一個關(guān)鍵調(diào)控樞紐（圖A-B）。EMSA和熒光素酶報告實驗證實，OsPHR12可以直接結(jié)合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3啟動子序列（圖C-F），并且這種結(jié)合依賴于啟動子中的P1BS元件（圖G）。歐易生物酵母文庫擁有GAL4系統(tǒng)、泛素系統(tǒng)，單雜、雙雜等多種酵母雜交篩選方法。江蘇技術(shù)酵母文庫做什么
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酵母文庫：近日，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物育種栽培研究所儲黃偉副研究員、曹黎明研究員為共同通訊作者，在Plant，Cell&Environment雜志（IF：7.228）在線發(fā)表了題為“Aconservedclathrin-coatedvesiclecomponent，OsSCYL2，regulatesplantinnateimmunityinrice”的研究論文，報道了水稻中一個被網(wǎng)格蛋白包被囊泡的一個重要組分OsSCYL2調(diào)控稻水先天免疫的分子機制。上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物所碩士研究生姚瑤和周繼華助理研究員為該論文的共同***作者。文章中酵母雙雜交實驗由歐易生物完成。江蘇技術(shù)酵母文庫做什么
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