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試劑盒用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株重要氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEVIgM抗體，這些抗體就會與HEV的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與初次孵育結(jié)合上的HEVIgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物。基蛋生物科技股份有限公司。檢測試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。福建試劑聯(lián)系商家

試劑盒雙向分散法：使用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上分散，兩者在相交處發(fā)生沉積線，以調(diào)查和判別抗血清中是否有抗體及其濃度。球脂板的制備：100mlpH7.1的磷酸鹽緩沖液加到15g的瓊脂內(nèi)，于水浴中加溫，攪拌，使瓊脂徹底溶解，趁熱用紗布過濾，待溶液冷卻到65℃左右時，參加疊氮鈉，使其在溶液中的濃度為0.1%。用移液管把瓊脂放在潔凈平皿或玻片上，約3mm厚，待其冷卻，徹底凝固后，用打孔器打孔。中心孔內(nèi)加適量抗原，周圍各孔內(nèi)分別參加50μl1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀釋的抗血清，37℃下孵育24h，調(diào)查有無沉積線發(fā)生，以判別血清的稀釋度。福建試劑聯(lián)系商家待檢樣本過多時，建議分批操作試劑盒。

試劑盒加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗刷：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。溫育：操作。洗刷：操作同5。顯色：試劑盒每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。停止：每孔加停止液50μl，停止反響(此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

試劑盒在盒底墊濕的紗布，后將板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)厲限制在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20～25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，試劑盒只需平置于操作臺上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。為確保這一點(diǎn)，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定。試劑盒方便試驗(yàn)操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作。

試劑盒的反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法：保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水特殊材料）上輕輕拍干；合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；2)加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法：1)顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；2)加樣時保持顯色劑不外流；3)A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械?？赡茉蛉缂咏K止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。試劑盒如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存。福建試劑聯(lián)系商家

試劑盒以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件。福建試劑聯(lián)系商家

試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了普遍的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。選擇試劑，選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣，可能原因：血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；福建試劑聯(lián)系商家