青海高通量篩選法

基于細(xì)胞水平的篩選的關(guān)鍵特征之一是可以一次篩選多個(gè)靶標(biāo)?；诩?xì)胞的篩選常用于以下情況下：1)所需的分子靶標(biāo)未知，2)靶標(biāo)無法在生化測定中充分重組，3)所需的表型只存在于細(xì)胞環(huán)境中，例如從一種細(xì)胞類型分化到另一種細(xì)胞類型?；诩?xì)胞的檢測貫穿于藥物發(fā)現(xiàn)的所有階段：靶標(biāo)選擇和驗(yàn)證、初步篩選、先導(dǎo)化合物識(shí)別、先導(dǎo)化合物優(yōu)化以及安全和毒理學(xué)篩選。介紹一些細(xì)胞水平分析的方法：細(xì)胞活力、報(bào)告基因、第二信使和高內(nèi)涵成像等。藥物高通量篩選平臺(tái)。青海高通量篩選法

充分利用藥用資源由于高通量篩選依賴數(shù)量龐大的樣品庫，實(shí)現(xiàn)了藥物篩選的規(guī)?；^大限度地利用了藥用物質(zhì)資源，提高了藥物發(fā)現(xiàn)的幾率，同時(shí)提高了發(fā)現(xiàn)新藥的質(zhì)量。微量篩選系統(tǒng)由于高通量篩選采用的是細(xì)胞、分子水平的篩選模型．樣品用量一般在微克級(jí)（μg），節(jié)省了樣品資源，奠定了“一藥多篩”的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)節(jié)省了實(shí)驗(yàn)材料，降低了單藥篩選成本。高度自動(dòng)化操作隨著對(duì)高通量藥物篩選的重視程度不斷提高，用于高通量藥物篩選操作設(shè)備和檢測儀器都有了長足發(fā)展，實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)控制的自動(dòng)化，減少了操作誤差的發(fā)生，提高了篩選效率和結(jié)果的準(zhǔn)確性。多學(xué)科理論和技術(shù)的結(jié)合在高通量篩選過程中，不僅應(yīng)用了普通的藥理學(xué)技術(shù)和理論，而且與藥物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、數(shù)學(xué)、微生物學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)等多學(xué)科緊密結(jié)合。這種多學(xué)科的有機(jī)結(jié)合，在藥物篩選領(lǐng)域產(chǎn)生大量新的課題和發(fā)展機(jī)會(huì)，促進(jìn)了藥物篩選理論和技術(shù)的發(fā)展。青海高通量篩選法高通量篩選技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)。

瓊脂平板篩選法，對(duì)突變體間差異可視化較弱，適用于突變庫的初步篩選，篩選后的突變體仍需要其他檢測方法如微孔板法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。數(shù)字影像分光光度計(jì)在瓊脂平板篩選方法中的應(yīng)用使瓊脂平板法的靈敏度提高且通量達(dá)到10^5克隆/d，若可根據(jù)目標(biāo)酶或代謝產(chǎn)物的特性建立瓊脂平板篩選方法，則無需使用依賴復(fù)雜儀器設(shè)備的超高通量篩選法。平板篩選法是微生物在平板固體培養(yǎng)基上進(jìn)行生殖反應(yīng)，從而反應(yīng)出來的性狀。微孔板篩選方法微孔板篩選方法通過檢測微孔板中底物或目標(biāo)產(chǎn)物所引起的吸光度或熒光變化對(duì)其進(jìn)行定量分析，可以保證篩選的精確性和靈敏度，是目前常用的篩選方法。根據(jù)熒光或吸光度精確檢測目標(biāo)產(chǎn)物的微孔板(Microtiterplate，MTP)篩選方法應(yīng)運(yùn)而生，并已廣泛應(yīng)用于酶和細(xì)胞工廠的定向改造中。但微孔板篩選法存在通量低、操作耗時(shí)等缺點(diǎn)。微孔板篩選法，可以理解成非常小的搖瓶，是微生物在液體環(huán)境中反應(yīng)出來的性狀。

高通量篩選的實(shí)驗(yàn)方法分子水平和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)方法（或稱篩選模型）是實(shí)現(xiàn)藥物高通量篩選的技術(shù)基礎(chǔ)。由于藥物高通量篩選要求同時(shí)處理大量樣品，實(shí)驗(yàn)體系必須微量化，而這些微量化的實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)根據(jù)新的科研成果來建立。第四軍醫(yī)大學(xué)周四元研究認(rèn)為，藥物高通量篩選模型的實(shí)驗(yàn)方法，根據(jù)其生物學(xué)特點(diǎn)，可分為以下幾類：受體結(jié)合分析法；酶活性測定法；細(xì)胞分子測定法；細(xì)胞活性測定法；代謝物質(zhì)測定法；基因產(chǎn)物測定法。這些實(shí)驗(yàn)方法，均已用于藥物高通量篩選中。高通量篩選的技術(shù)優(yōu)點(diǎn)。

高通量篩選初是伴隨組合化學(xué)而產(chǎn)生的一種藥物篩選方式。1990年代末，組合化學(xué)的出現(xiàn)改變了人類獲取新化合物的方式，人們可以通過較少的步驟在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)合成大量化合物，在這樣的背景下高通量篩選的技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。高通量篩選技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量候選化合物完成篩選，經(jīng)過發(fā)展，已經(jīng)成為比較成熟的技術(shù)，不僅應(yīng)用于對(duì)組合化學(xué)庫的化合物篩選，還更多地應(yīng)用于對(duì)現(xiàn)有化合物庫的篩選。世界各大藥物生產(chǎn)商都建立有自己的化合物庫和高通量篩選機(jī)構(gòu)，對(duì)有潛力形成藥物的化合物進(jìn)行篦梳式的篩選。高通量篩選是什么平臺(tái)。青海高通量篩選法

高通量篩選的主要目的是什么。青海高通量篩選法

蛋白質(zhì)片段互補(bǔ)分析(PCA，也稱為雙分子熒光互補(bǔ))和雙雜交篩選允許檢測細(xì)胞中蛋白質(zhì)相互作用的形成/抑制。PCA將單個(gè)檢測蛋白（熒光素酶、GFP、GAL）分成兩部分，這些部分與感興趣的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用融合；如果伴侶結(jié)合，檢測蛋白會(huì)重新形成并檢測到信號(hào)。高內(nèi)涵成像平臺(tái)（HCS）由于其能夠提供出色的單細(xì)胞分析功能和短的數(shù)據(jù)采集時(shí)間獲得大家的青睞。一般的實(shí)驗(yàn)流程為設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)并使用自動(dòng)分液儀將細(xì)胞接種到96、384或1536孔板中；然后加入化合物，由于細(xì)胞在孵育過程中會(huì)對(duì)化合物做出反應(yīng)，隨后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，并通過HCS成像系統(tǒng)獲取圖像，通過軟件分析獲取的圖像以確定化合物的劑量反應(yīng)。青海高通量篩選法