過濾:配成的培養(yǎng)基,若無特殊要求,可省略此步。若有沉淀或渾濁,需要澄清的,液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾。而固體培養(yǎng)基可用中間夾一薄層脫脂棉的雙層紗布過濾。如果過濾法還不能達到澄清的要求,則可用蛋清澄清法,即培養(yǎng)基加熱冷卻到50℃~60℃,裝入三角瓶內(nèi)(不超過容量的二分之一),按1000ml加入1個~2個雞蛋的蛋清,用力搖晃3min~5min,高壓蒸汽滅菌121℃、20min,取出趁熱過濾即可。擺斜面:裝在試管中的瓊脂培養(yǎng)基,在滅菌完成后,趁熱立即擺放在木棒(或玻璃棒)上,并完成適時地斜度,冷卻后,瓊脂凝固即成斜面。斜面長度不要超過試管的二分之一。培養(yǎng)基的滅菌:一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。江西培養(yǎng)基制備器報價
培養(yǎng)基配制:配制用水,培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基:培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,若pH值超過7.6或遠低于6.8,則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。血清:培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。西藏培養(yǎng)基制備器品牌培養(yǎng)基制備器勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁。
馬鈴薯培養(yǎng)基的制作過程:(1)稱量和熬煮:按培養(yǎng)基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中,加水1000ml,在加熱器上加熱至沸騰,維持20-30min,用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾,濾渣棄取。濾液補充水分到1000ml。(2)加熱溶解:把濾液放入鍋中,加入葡萄糖20g,瓊脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉網(wǎng)上,小火加熱,并用玻棒不斷攪拌,以防瓊脂糊底或溢出,待瓊脂完全溶解后,再補充水分至所需量。(3)分裝:按實訓(xùn)要求,將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或500ml三角瓶內(nèi)。分裝時可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上造成污染。分裝量:固體培養(yǎng)基約為試管高度的1/5,滅菌后制成斜面,分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積的一半為宜;半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝。(4)加棉塞:培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等),以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染,并保證有良好的通氣性能。
培養(yǎng)基的安全分裝:無菌補料:通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖。通過使用一個瓶子將添加劑添加到分裝開口或通過一個septum膜,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。無菌分裝:培養(yǎng)基制備器的分裝口可以在分裝的時候打開,用于無菌分裝培養(yǎng)基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口。為了確保培養(yǎng)基的無菌分裝,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌。培養(yǎng)基可以通過集成的空壓機產(chǎn)生的無菌空氣壓力分裝或通過連接到常見的蠕動泵或其他集成成泵的裝置,來進行培養(yǎng)基的分裝。分裝選項:制備和滅菌過的培養(yǎng)基可以通過一個軟管進行分裝。在每次滅菌進程中,內(nèi)吸管和分裝口也通過進入的蒸汽進行了滅菌。分裝軟管和連接到該軟管的分裝接頭必須使用合適的蒸汽滅菌工藝預(yù)先滅菌,并且必須在無菌條件下連接到分裝口。培養(yǎng)基制備器使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。
培養(yǎng)基的購置:從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看,不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品,甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進行評價后選擇合格的供應(yīng)商,這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過了質(zhì)量管理體系的認證是較為客觀的評價指標(biāo)。要求生產(chǎn)企業(yè)提供:培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。培養(yǎng)基的不正確制備會導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題。湖南自動培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器智能溫控功能,限度降低分裝機噪。江西培養(yǎng)基制備器報價
濕熱滅菌:濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進行,高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過1000mL,否則滅菌時可能會造成過度加熱。所有的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或使用說明的規(guī)定進行。滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過度。這對于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。過濾除菌:過濾除菌可在真空或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的各個部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)(如物品),為了達到有效過濾,應(yīng)事先將濾膜用無菌水潤濕。江西培養(yǎng)基制備器報價