培養(yǎng)基制備技術(shù):一、玻璃器皿的清洗:在制備培養(yǎng)基的過程中,首先要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過一定的處理,洗刷干凈。有的還要進行包裝,經(jīng)過滅菌等準(zhǔn)備就緒后,才能使用。1、新購的玻璃器皿:除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時,使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。2、用過的玻璃器皿:凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時沖洗,吸取過化學(xué)試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過適當(dāng)消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。寧夏培養(yǎng)基制備器廠家
實驗室在制作培養(yǎng)基時候的經(jīng)驗總結(jié):1、培養(yǎng)基成份稱量:培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂,較好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側(cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進行一次檢查。2、培養(yǎng)基成份的混合與溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置于高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。中國香港培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多,根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置,很好現(xiàn)配現(xiàn)用。
培養(yǎng)基滅菌方法有哪五種類型:1、輻射滅菌原理方法:輻射滅菌原理:是用高能電磁輻射和細(xì)菌核酸的光化學(xué)反應(yīng)引起細(xì)菌死亡。常用的是紫外線,X射線和伽馬射線。主要用于室內(nèi)空氣和器皿的表面消毒。2、干熱滅菌原理方法:干熱滅菌原理:是采用高溫氧化微生物,使蛋白質(zhì)變性并濃縮電解質(zhì)以殺死微生物。3、化藥滅菌原理方法,化藥滅菌原理:使用化藥與微生物細(xì)胞中的成分發(fā)生反應(yīng),從而使蛋白質(zhì)變性酶失活。4、過濾滅菌原理方法:過濾滅菌原理:是使用不能滲透的微生物濾膜進行滅菌。使用方法是使用0.01-0.45毫米的細(xì)孔濾膜對壓縮空氣,酶溶液和其他對熱不穩(wěn)定的復(fù)合溶液進行滅菌。5、濕熱滅菌原理方法:在工業(yè)生產(chǎn)中,用于滅菌對于培養(yǎng)基,管道和設(shè)備,通常將蒸汽加熱到一定溫度并保持一段時間,這稱為濕熱滅菌。濕熱滅菌原理:是直接用蒸汽進行滅菌。蒸汽冷凝后會釋放出大量潛熱。蒸汽具有強大的穿透力,破壞細(xì)菌蛋白質(zhì)和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活并殺死由于代謝紊亂引起的微生物。培養(yǎng)基制備器可以將配置、滅菌合二為一,較后恒溫保持等待分裝。極大地提高了效率。
配制培養(yǎng)基的原則:控制培養(yǎng)基的條件,控制培養(yǎng)基的pH配制培養(yǎng)基必須根據(jù)微生物的特點調(diào)節(jié)pH。各大類微生物要求的適宜生長pH范圍不同。如霉菌與酵母菌一般為5.0-6.0,細(xì)菌為6.5-7.5.放線菌為7.5-8.5.培養(yǎng)基的pH與其C/N有極大關(guān)系。C/N高的培養(yǎng)基,例如培養(yǎng)各種的培養(yǎng)基,經(jīng)培養(yǎng)后其pH明顯下降;相反,C/N低的培養(yǎng)基,例如培養(yǎng)一般細(xì)菌的培養(yǎng)基,經(jīng)培養(yǎng)后,其pH則明顯上升。這是由于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗與代謝產(chǎn)物的積累,改變了培養(yǎng)基的pH,若不及時控制,將導(dǎo)致菌體生長停止。液體培養(yǎng)基在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周圍,形成透過養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。中國香港培養(yǎng)基制備器
強力磁力攪拌培養(yǎng)基在內(nèi)腔里混合的均勻性得到確保,并避免凝結(jié)。寧夏培養(yǎng)基制備器廠家
培養(yǎng)基的制備:(1)稱量:根據(jù)培養(yǎng)基的配方,稱取適量藥品于搪瓷杯中;(2)溶解:用量筒量取所需水量,置電爐上加熱,一邊攪拌,至完全溶解,加熱至沸騰,拔掉電源,待冷卻;(3)分裝:根據(jù)不同需要,立即趁熱分裝入三角瓶或試管中,分裝三角瓶以不超過三角瓶一半為宜,分裝試管一般為管長的1/5(需根據(jù)試管的大小而定).液體培養(yǎng)基如乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基約分裝10毫升左右.(4)塞硅膠塞:裝好培養(yǎng)基的試管應(yīng)塞上硅膠塞,松緊合適,緊貼管壁,不留縫隙,約1/2塞入內(nèi),這樣即可過濾空氣,避免雜菌侵入,又可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā).(5)包裝:三角瓶棉塞頭部應(yīng)用錫箔紙包扎,試管集中于試管簍.2、無菌水的制備:(1)用10ml移液管量取9.2ml蒸餾水(稀釋水)裝入試管中.(2)用100ml量筒量取95ml蒸餾水(稀釋水)裝入150ml的三角瓶中.可置少許玻璃珠于三角瓶內(nèi),防止暴沸.(3)量取240ml蒸餾水(稀釋水)于250ml的三角瓶中,塞上瓶塞用牛皮紙包扎好,高壓滅菌備用。寧夏培養(yǎng)基制備器廠家