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配制培養(yǎng)基的原則:滅菌處理:為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時(shí)嚴(yán)格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。長(zhǎng)時(shí)間的高溫滅菌會(huì)使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa(110℃)滅菌20~30min某些對(duì)糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過(guò)濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。長(zhǎng)時(shí)間高溫滅菌也會(huì)使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽(yáng)離子形成難溶性化合物而產(chǎn)生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生,可將這些物質(zhì)分別滅菌,冷卻后再混合;也可在培養(yǎng)基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡(luò)合物,防止沉淀的產(chǎn)生。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低,應(yīng)在配制培養(yǎng)基時(shí)加以調(diào)節(jié)。培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。中國(guó)香港不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng):1.培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂.較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后.還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。2.培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化.也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng),以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。新疆觸摸屏培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。
高層斜面:制備高層斜面分裝于試管,約占試管容積的1/3,滅菌后趁熱放置成高層短斜面,待其凝固后應(yīng)用。分裝好的培養(yǎng)基或緩沖液等及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天(2h內(nèi)較佳)進(jìn)行滅菌處理。液體、半固體培養(yǎng)基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養(yǎng)基,滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中。通過(guò)無(wú)菌技術(shù)為測(cè)試制備的每一批培養(yǎng)基其PH在放冷至室溫(25°)后,都應(yīng)測(cè)定。一個(gè)扁平的pH計(jì)用于培養(yǎng)基表面pH值的測(cè)定,浸入式的pH計(jì)用于液體的測(cè)定。各供應(yīng)商提供的培養(yǎng)基的pH應(yīng)該在規(guī)定的±0.2的范圍內(nèi),除非通過(guò)驗(yàn)證得到更寬的范圍。
制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基:培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過(guò)菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,倒置過(guò)來(lái),平放在恒溫箱里,24小時(shí)后檢查,如培養(yǎng)基末長(zhǎng)雜菌,即可用來(lái)培養(yǎng)微生物。制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):易于控制微生物的生長(zhǎng)代謝狀態(tài)。
培養(yǎng)基制備技術(shù):一、玻璃器皿的清洗:在制備培養(yǎng)基的過(guò)程中,首先要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過(guò)一定的處理,洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝,經(jīng)過(guò)滅菌等準(zhǔn)備就緒后,才能使用。1、新購(gòu)的玻璃器皿:除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時(shí),使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對(duì)容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動(dòng)容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。2、用過(guò)的玻璃器皿:凡確無(wú)病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時(shí)沖洗,吸取過(guò)化學(xué)試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過(guò)適當(dāng)消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:正確制備培養(yǎng)基時(shí)微生物檢驗(yàn)的較基礎(chǔ)步驟之一。西藏培養(yǎng)基制備器品牌
培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。中國(guó)香港不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器
制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)方法步驟:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過(guò)火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過(guò)來(lái)放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。中國(guó)香港不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器
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