層析柱與液相柱的區(qū)別1、壓力液相色譜柱(尤其是分析性高效液相色譜):壓力較高,一般為10-20Mpa層析柱:一般為常壓,或使用真空泵(0.1Mpa左右)2、填料液相色譜柱:粒徑較小(常規(guī)5-20um)層析柱:粒徑較大3、分離度由第二項(xiàng)決定,粒徑越小,單位長(zhǎng)度下理論塔板數(shù)越高液相色譜柱:分離度比層析柱好4、效率液相色譜柱:分離速度快,一般在一小時(shí)內(nèi)層析柱:分離時(shí)間長(zhǎng),一小時(shí)以上。親和層析 一般用于純化蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)的方法的主要依據(jù)是各種大分子物質(zhì)之間理化特性的差異性。下面我們來(lái)分析一下親和層析過(guò)程中的注意事項(xiàng)。對(duì)層析吸附是吸附到玻璃柱(柱層析法)或玻璃板上(薄層層析法)。青島實(shí)驗(yàn)室層析柱廠家
吸附作用是指某些物質(zhì)可以指向它的出現(xiàn)從溶液中,溶質(zhì)濃度。吸附劑的吸附強(qiáng)度的物質(zhì)或溶劑和吸附劑的性質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。當(dāng)溶劑在溶劑的創(chuàng)新名聲,為吸附材料吸附劑的親和性會(huì)發(fā)生變化,使吸附材料的吸附去除,這種救濟(jì)的過(guò)程稱為“洗脫”或“展層”。對(duì)層析吸附是吸附到玻璃柱(柱層析法)或玻璃板上(薄層層析法)。溶劑的吸附能力可由和變化的影響,在樣本材料吸附,洗脫液沖刷變化,吸附容量,吸附與洗脫液前進(jìn)。當(dāng)材料是一種新的吸附劑解吸向前移動(dòng),遇到從前面。吸附的物質(zhì)然后從洗脫液中釋放。通過(guò)這樣一個(gè)過(guò)程的吸附解吸,解吸,材料可以在洗脫液的移動(dòng)方向移動(dòng)。移動(dòng)速度取決于吸附劑的吸附容量。陜西實(shí)驗(yàn)室玻璃層析柱圖片吸附層析柱適用于吸附分離,離子交換層析柱適用于離子交換分離,凝膠層析柱適用于分子大小分離。
干法裝柱的一個(gè)缺點(diǎn)就是在裝入洗脫劑后,由于溶劑和固定相之間的吸附放熱,所以柱子容易變花,影響分離效果。解決的方法是:(1)固定相一定要添加結(jié)實(shí);(2)一定要用較多的溶劑“走柱子”,直到柱子的下端不再發(fā)燙,恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。無(wú)論使用哪種方法裝柱,都要求所裝的柱子結(jié)實(shí)、勻稱、無(wú)氣泡。上樣也有濕法和干法之分:濕法一般用淋洗劑溶解樣品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶劑越少越好。再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液,沿著層析柱內(nèi)壁緩慢地均勻加入。在不用海沙的情況下,盡量不要破壞硅膠面。加樣后,打開(kāi)柱底活塞,讓固定相充分地吸附所加樣品。然后再加入一些洗脫劑,再充分地吸附后將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。
緩沖液中有氣泡○上柱前將緩沖液脫氣○在緩沖液入口使用空氣感應(yīng)器溫度影響,如在冷室操作后馬上在室溫操作,或低溫緩沖液直接在室溫使用○將緩沖液在使用前達(dá)到熱平衡2.層析柱干了還可以再使用嗎?○通常不可以,但也取決于具體的純化需求。3.膠平面與柱頭有間隙怎么辦?由于不當(dāng)裝填或者篩網(wǎng)孔徑與填料粒徑不匹配,導(dǎo)致填料漏出○更換篩網(wǎng),重新裝填,層析柱堵塞,導(dǎo)致反壓增大○根據(jù)說(shuō)明書(shū)清洗○更換濾膜○樣品上柱前先澄清柱床裝填太差,裝柱過(guò)程中未有效壓縮填料○調(diào)整柱頭高度,測(cè)柱效填料被用于條件,如有機(jī)溶劑○檢查緩沖液,選擇合適的緩沖液條件層析柱可以用于蛋白質(zhì)和核酸的純化和分析。
當(dāng)與基于膜的分子排阻超濾過(guò)程一起使用時(shí),膜層析按FDA和EMEA規(guī)定,提供病毒去除的正交法。這使BioMarin公司免于進(jìn)行DNA分批檢測(cè),成為蛋白質(zhì)藥物生產(chǎn)中的一個(gè)里程碑。而且,除了每批生產(chǎn)平均節(jié)省2000美金以外,BioMarin公司已經(jīng)減少了生產(chǎn)批次失敗的可能性,而失敗的代價(jià)是極其高昂的。通過(guò)采用與此類似的工藝,生物制藥公司在單克隆抗體類和重組蛋白藥物的生產(chǎn)中可節(jié)省數(shù)千萬(wàn)美元。膜層析可做成拋棄型或重復(fù)使用型。它們的應(yīng)用非常靈活,能經(jīng)常作為精純步驟添加到現(xiàn)有的生產(chǎn)環(huán)節(jié)中。由于膜層析可以一次性使用,不存在清潔或清潔檢驗(yàn)的問(wèn)題,加快了生產(chǎn)速度并且減少了勞動(dòng)力和緩沖液成本。正相層析柱:填充物是極性的(如硅膠、氨基化硅膠等),樣品是非極性的。青海中試小型玻璃層析柱廠家直銷
層析柱用于分離和純化復(fù)雜混合物中的化合物。青島實(shí)驗(yàn)室層析柱廠家
操作簡(jiǎn)便、易于維護(hù)和清洗操作時(shí)只需要將樣品注入層析柱,并通過(guò)恰當(dāng)?shù)木彌_液或溶劑,控制樣品在柱內(nèi)流動(dòng)即可得到分離和純化所需組分。而且,玻璃層析柱的柱體和填料均為可重復(fù)使用,使用后只需進(jìn)行簡(jiǎn)單的清洗和消毒即可維護(hù)保養(yǎng)。玻璃層析柱在生物學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。在蛋白質(zhì)純化和結(jié)構(gòu)研究中,它被廣泛應(yīng)用于分離不同大小、形狀和電荷的蛋白質(zhì)分子。在天然產(chǎn)物和中藥提取中,它能夠分離和純化其中的活性成分,提高其藥效和生物活性。在化學(xué)合成中,它能夠快速地分離純化反應(yīng)產(chǎn)物并去除雜質(zhì)。青島實(shí)驗(yàn)室層析柱廠家