整體化色譜柱填料技術(shù) 整體化色譜柱(monolithic column)也是近年液相色譜柱填料研究的另一個重要方向。整體柱，又稱為棒狀柱，是一種用有機或無機聚合方法在色譜柱內(nèi)進行原位聚合的連續(xù)床固定相。與常規(guī)裝填的液相色譜柱相比，整體柱具有更好的多孔性和滲透性，可以使用高流速實現(xiàn)快速的傳質(zhì)分離。聚合物整體柱一般采用離子交換或親和色譜方式，用于生物大分子如蛋白、抗體、DNA 的超快速分析，這樣的色譜柱包括Bio-Monolith 離子交換柱和Protein A、Protein G 親和色譜柱，以及ThermoroSwift IEX 離子交換柱和ProSwift RP 柱。使用此類整體化色譜柱分析大分子物質(zhì)時，分離通?？梢栽趲追昼妰?nèi)完成。無機基質(zhì)的整體柱一般采用硅膠以及在硅膠表面鍵合的反相填料，柱床中既有供流動相流過的粗孔(約2 μm)，又有便于溶質(zhì)進行傳質(zhì)的中孔(幾十個納米)，如圖5(來源于Merck 的目錄資料)所示。市場上商品化的整體柱產(chǎn)品不多，如Chromolith? 整體柱，該柱子具有非常低的柱壓和較高的基質(zhì)耐受能力，因此在普通高效液相色譜儀以及超高效液相色譜儀上都可以兼容。青島口碑好液相色譜填料
液相色譜填料技術(shù)進展 正在得到更的應用，例如，使用1.8 μm 的C18 色譜柱分析《中國藥典》2015 年版一部中的復方丹參滴丸指紋圖譜，其時間可以控制在10 min 以內(nèi)中國藥典對亞2 微米色譜柱技術(shù)革新和應用給予高度的關(guān)注，適時地修訂了液相色譜法的相關(guān)內(nèi)容。中國藥典2015 年版四部通則0512 色譜法規(guī)定，若需使用小粒徑(約2μm)填充劑，輸液泵的性能、進樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配;如有必要，色譜條件也應作適當?shù)恼{(diào)整。當對其測定結(jié)果產(chǎn)生爭議時，應以品種項下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準。西安直銷液相色譜填料
不同選擇性的色譜固定相 一般硅膠基質(zhì)填料的固定相其pH適用范圍為2~8。為提高硅膠基質(zhì)的填料鍵合相在酸性條件下的穩(wěn)定性，一般在碳鏈的硅烷基側(cè)鏈上采用大體積的有機基團進行保護，比如采用雙異丁基或雙異丙基的側(cè)鏈保護，使得此類色譜填料能夠穩(wěn)定地用于pH0.8~8 的流動相體系中，而不會導致硅烷鍵的流失。如中國藥典方法中，洛伐他汀、氫溴酸右美沙芬等在較低pH 條件下，使用這類的色譜柱可以獲得較好的耐用性。 在提高硅膠基質(zhì)填料堿性穩(wěn)定性方面，除了使用致密鍵合、雙配位鍵合以及雙重封端等技術(shù)，還使用硅膠- 有機雜化顆粒，或者在硅膠表面進行聚合物包覆，提高硅膠在堿性條下的穩(wěn)定性，同時降低硅 醇基在堿性條件下的解離，避免堿性化合物拖尾。近期推出能夠耐受高pH 穩(wěn)定性的Poroshell HPH-C18(2.7 μm)和C8 填料(4 μm)，這種填料兼顧了表面多孔型填料和硅膠表面有機雜化的優(yōu)勢，具有高柱效、寬pH 耐受范圍(2~11)的優(yōu)勢。
不同選擇性的色譜固定相 由于反相色譜分離基于多種作用力的結(jié)果，不同鍵合相或同一種鍵合相但不同的硅膠基質(zhì)、封端技術(shù)和鍵合技術(shù)，其疏水作用、空間位阻、氫鍵作用、靜電作用、π-π作用、偶極-偶極作用等能力不同，對化合物的分離能力不同，故而表現(xiàn)出不一樣的選擇性。比如，在碳鏈中嵌入極性的酰胺基團，不僅能夠使鍵合相的水相兼容性增加，而且可以提高化合物與固定相之間的氫鍵作用能力，使之獲得與普通C18 填料不一樣的選擇性。這樣的色譜柱有ZORBAX Bonus RP 和Waters Symmetry shield 等。Huawei Gu等利用Bonus RP 色譜柱與其他常規(guī)碳鏈反相色譜柱選擇性的不同，使用二維液相色譜實現(xiàn)復雜體系的分離。又如，苯基柱可以提供π-π 作用，用于含有苯環(huán)或能提供π 鍵作用的結(jié)構(gòu)類似物分析;而五氟苯基(Penta Fluorophenyl Propyl，PFP)柱(則除了提供π-π 作用外，還可以提供偶極作用、靜電作用等，提高了苯環(huán)上位置異構(gòu)體的分辨能力。
多種分離模式的應用 LCCC 法是根據(jù)聚合物的功能基團、嵌段結(jié)構(gòu)的差異進行聚合物分離的一種色譜技術(shù)。LCCC 法的原理是基于臨界點之上、臨界點之下以及臨界點附近的標度理論。當使用多孔填充材料作為固定相時，分子排阻色譜(size exclusion chromatography，SEC)和相互作用色譜(interaction chromatography，IC)的分離機制在分離聚合物時同時發(fā)生作用。在某個特殊色譜條件(固定相、流動相組成、溫度)下，存在2 種分離機制的臨界點，被稱為焓熵互補點或色譜臨界條件(critical conditions)或臨界吸附點(critical adsorption point，CAP)。在這一點，聚合物分子按照分子末端功能基團的不同或嵌段結(jié)構(gòu)的差異分離，與分子的聚合物摩爾質(zhì)量(分子量)無關(guān)，聚合物的洗脫體積等于色譜柱的空隙體積。目前，這一技術(shù)成功用于脂溶性聚合物的分析，對于水溶性聚合物的應用研究有待深入和擴展。為適應大分子量聚合物的分離需要，比常規(guī)孔徑、粒徑大得多的填料和更寬柱徑的色譜柱也應隨之出現(xiàn)。天津液相色譜填料哪家好
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多種分離模式的應用 目前液相色譜中主要應用的依然是反相色譜，不過隨著色譜技術(shù)的發(fā)展和分析要求的提高，其他一些分離模式正逐步得到更加的應用，如親水作用色譜(HILIC)、超臨界流體色譜(supercritical fluid chromatography，SFC)、臨界點色譜(liquid chromatography at critical condition，LCCC)和多維色譜技術(shù)等。 HILIC 是近年來逐漸被認可的一種強極性化合物分離方法，它是基于極性化合物在色譜固定相表面水層和流動相之間進行的親水分配作用達到保留的一種分離模式。在HILIC分離中，流動相中水的比例越小，則洗脫能力越弱;反之，洗脫能力越強。化合物的極性越小，則保留越弱;反之，則保留越強。HILIC 模式可以跟任何檢測器兼容，并能提高質(zhì)譜的靈敏度，避免使用離子對試劑，避免進行衍生化，是極性化合物分析**有潛力的分離模式。HILIC 模式一般采用高純硅膠、硅膠表面鍵合二醇基、酰胺、兩性離子基團等基團或極性聚合物等為固定相，而采用高比例的有機相為流動相。青島口碑好液相色譜填料
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