2.3單體法
單體聚合法是目前研究**多、被***采用的制備方法。單體聚合法是在有機單體和磁性粒子共同存在的情況下，根據(jù)不同的聚合方式加入表面活性劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑等聚合制備磁性高分子微球的方法。常用的方法主要包括乳液聚合、（微）懸浮聚合、分散聚合以及活性聚合等。其中乳液聚合又分為無皂乳液聚合、Pickering乳液聚合法、種子乳液聚合、細乳液聚合法、反相乳液聚合、原位乳液聚合等。
2.3.1乳液聚合
無皂乳液聚合是指在反應過程中完全不加乳化劑或者**加入微量乳化劑(其濃度小于臨界膠束濃度(CMC))的乳液聚合過程Wu采用將通過油酸改性后的Fe3O4納米粒子與溫敏性N-異丙基丙稀醜胺在交聯(lián)劑DVB作用下，通過無培乳液聚合方法制備了具有磁場和溫度雙重相應的復合微球，該復合微球具有核殼結構，尺寸約為100nm，其比較低臨界溶解溫度(LCST)在40-45℃。Yamauchi等利用無皂乳液聚合法制備出平均粒徑達到515nm、比飽和磁化強度達到7.3A·m2/kg的磁性高分子復合微球。
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熒光微球分析技術屬于化學材料發(fā)展結果，可用于細胞表面抗原的檢測、退行性神經(jīng)病變示蹤物、吞噬功能的檢測、血流分析、敏感性診斷試劑等，本文介紹了熒光微球分析技術以及熒光微球吞噬實驗的操作步驟。 熒光微球分析 技術簡介 熒光微球分析技術是近年來化學材料科學活躍發(fā)展 的產(chǎn)物，各種大小(0.2～10μm)可產(chǎn)生熒光和色彩的人工微球應運而生，目前各種材料人工合成、多種顏色和規(guī)格的熒光微球有2大類，一種是表面不帶修飾基團的微球，另一種是攜帶各種化學修飾基團，包括羧基化修飾、氨基修飾、巰基或醛巰基修飾等的微球。 青島分離純化微球哪家強
反相乳液聚合是制備親水性磁性聚合物微球的一種方法，其主要特點是將水溶性單體溶于水中，然后在乳化劑的作用分散于非極性液體中，形成W/O分散相的聚合反應。Hong[15]等首先制備了以葡聚糖為穩(wěn)定劑的水基磁流體，苯乙稀為連續(xù)相，在Span-85和CTAB乳化劑作用下，采用反相乳液聚合方法制備了粒徑為200nm，高磁含量的復合微球。
Wang等提出了一種新的在雙乳液體系中的原位聚合技術，并用該法制備了PS-HEMA磁性高分子微球。Wang等首先以溶有PS-HEMA共聚物的乙酸乙酯為油相，F(xiàn)eCl2/FeCl3溶液為內(nèi)部水相（W1），PVA-217和Na2SO4為外部水相，制備了W1/O/W2雙乳液體系。然后向上述體系添加氨水溶液，堿溶液擴散至內(nèi)部水相與鐵離子反應形成磁核。與傳統(tǒng)原位法相比，該法所得微球包埋率高(26.1%)和磁化強度大(12.2emu/g)。由于原位乳液聚合制備的聚合物納米粒子具有顆粒尺寸小、分布均勻、分散穩(wěn)定等優(yōu)點，逐漸引導著乳液聚合新的發(fā)展方向。
這些熒光微球正廣泛應用于生命科學研究的多個領域中，如： (1)細胞表面抗原的檢測，包括CD4/CD8表面抗原的***計數(shù);細胞表面低豐度表達受體的分析;骨髓移植受體內(nèi)供體紅細胞的檢測;白色***抗原檢測等。 (2)退行性神經(jīng)病變示蹤物，熒光微球具有***、與神經(jīng)細胞結合時間長以及受注射部位影響極小的特點。 (3)吞噬功能的檢測，0.6～2.0μm大小的熒光微球適合于這一類的研究，如分析大鼠中性粒細胞、人橫紋導管細胞、小鼠腹膜巨噬細胞、人多核白細胞的吞噬功能或不同調理素調理作用對吞噬功能的影響等。 (4)血流分析，10-15 μm大小7種顏色的熒光可供研究組織中局部血流情況，如**脈管血流速率、視網(wǎng)膜和脈絡膜循環(huán)、肺泡微管的功能直徑定位等。 (5)敏感性診斷試劑，如替代一些已開展應用的微球診斷試驗：膠乳凝集試驗、微球捕獲ELASA、雙位點夾心法等，它較傳統(tǒng)比色方法更為靈敏;另有新近誕生的流式微球分析技術(Cytometric Bead Array CBA)通過將不同熒光強度的聚苯乙烯微球包被上多種高特異性的單克隆抗體，在微球“三明治”平臺上進行可溶性蛋白的檢測，由此而使得1份微量標本可同時1次定量分析多種可溶性蛋白，**節(jié)約了樣本量和操作時間，靈敏度也較傳統(tǒng)的ELISA
常用的純化方法冷凍結晶法 冷凍結晶法是在低溫的條件下，依據(jù)混合脂肪酸各組分的凝固點差異進行純化，進而達到純化多不飽和脂肪酸的目的。將混合脂肪酸溶解在**或乙醇中，置于低溫下，在溶液中短鏈脂肪酸較長鏈脂肪酸的溶解度低，飽和脂肪酸較不飽和脂肪酸的溶解度低，這種溶解度差異隨溫度降低表現(xiàn)更為。 冷凍結晶法工藝原理簡單，操作方便，有效成分不易發(fā)生變性反應。但其操作過程中溫度要求苛刻，需要回收大量的有機溶劑，純化效率不高，這限制了大規(guī)模的生產(chǎn)，但可以用于生產(chǎn)低成本的保健品類，從而滿足中低層消費者的需求。青島分離純化微球哪家強
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磁性高分子微球的制備
目前制備磁性高分子納米微球的方法主要分為五類，其主要包括：包埋法、原位法、單體聚合法、界面沉積法及自組裝法。
2.1包埋法
包埋法是將聚合物溶解在含有磁性超微粒子的溶液中，然后加入大量的沉淀劑，通過交聯(lián)、絮凝、霧化、沉積、蒸發(fā)等手段使高分子物質沉析在磁性粒子表面形成具有核殼結構的復合微球。高分子物質與磁性粒子主要通過范德華力、氫鍵、螯合作用或共價鍵等作用力結合。Li等通過化學共沉淀法合成納米粒子Fe3O4磁核，以殼聚糖為包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交聯(lián)法制備了具有核-殼結構的磁性高分子微球-殼聚糖磁性微球，并偶聯(lián)肝素配基得到了一種新型親和磁性微球。所得親和磁性微球具有較窄的粒徑分布、形狀規(guī)整，粒徑在50nm左右。將磁分離技術應用于凝血酶的分離純化，得到了較好的效果（酶比活達1879.71U/mg，得率85%，純化倍數(shù)11.057，為傳統(tǒng)柱層析法的兩倍）。Chi?riuc等將含F(xiàn)e2+和Fe3+溶液逐滴加入殼聚糖的NaOH溶液中制的可用于負載頭孢霉素的磁性殼聚糖微球。
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