分離純化多肽的常用方法-反相高效液相色譜 結(jié)果與保留值之間的關(guān)系:利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結(jié)構(gòu)的多肽在柱上的保留情況。為了獲得一系列的保留系數(shù),Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質(zhì)與結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,得出了不同氨基酸組成對保留系數(shù)影響的關(guān)系,其中極性氨基酸殘基在2~20 氨基酸組成的肽中,可減少在柱上的保留時間;在10~60 氨基酸組成的肽中,非極性氨基酸較多也可減少在柱上的保留時間,而含5~25 個氨基酸的小肽中,非極性氨基酸增加可延長在柱上的保留時間。 同時有不少文獻(xiàn)報道了肽鏈長度、氨基酸組成、溫度等條件對保留情況的影響,并利用計算機(jī)處理分析得到每種多肽的分離提取的比較好條件。 肽圖分析(Peptide Mapping):肽圖分析是根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點,使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶[ 一般未肽鏈內(nèi)切酶(endopeptidase)]作用于特殊的肽鏈位點將多肽裂解成小片斷,通過一定的分離檢測手段形成特征性指紋圖譜,肽圖分析對多肽結(jié)構(gòu)研究合特性鑒別具有重要意義。 合肥多肽分離填料制造廠家
分離純化多肽的常用方法-膜蛋白色譜 CMP+分離強(qiáng)蔬水性蛋白、多肽混合物的層析系統(tǒng),一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,并由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(tuán)(P-端),又具有陽離子鈣(C-端),與固定相結(jié)合主要決定于膜蛋白的大小、SDS 結(jié)合量有關(guān)。利用原子散射法研究cAMP的分離機(jī)制發(fā)現(xiàn),樣品與SDS 結(jié)合后在離子交換柱上存在SDS 分子、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,從而達(dá)到分級分離的目的。直銷多肽分離填料
分離純化多肽的常用方法-高效液相色譜(HPLC) HPLC 的出現(xiàn)為肽類物質(zhì)的分離提供了有利的方法手段,因為蛋白質(zhì)、多肽的HPLC 應(yīng)用與其它化合物相比,在適宜的色譜條件下不僅可以在短時間內(nèi)完成分離目的,更重要的是HPLC 能在制備規(guī)模上生產(chǎn)具有生物活性的多肽。因此在尋找多肽類物質(zhì)分離制備的比較好條件上,不少學(xué)者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何選擇固定相材料、洗脫液種類、如何分析測定都是目前研究的內(nèi)容。海博納新材料科技(蘇州)有限公司歡迎來電
多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,同理類推還有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽。 肽(peptide)是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。 一般肽中含有的氨基酸的數(shù)目為二到九,根據(jù)肽中氨基酸的數(shù)量的不同,肽有多種不同的稱呼:由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,同理類推還有三肽、四肽、五肽等,一直到九肽。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,道爾頓),能透過半透膜,不被三氯乙酸所沉淀。也有文獻(xiàn)把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),換言之,蛋白質(zhì)有時也被稱為多肽。多肽也簡稱為肽,是20世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)的。
分離純化多肽的常用方法-疏水作用色譜 HIC 是利用多肽中含有疏水基因,可與固定相之間產(chǎn)生疏水作用而達(dá)到分離分析的目的,其比RP-GPLC 具有較少使多肽變性的特點。利用GIC 分離生產(chǎn)(GH)產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性比EP-GPLC 分離的要穩(wěn)定,活性較穩(wěn)定。Geng 等利用HIC 柱的低變性特點,將大腸桿菌表達(dá)出的經(jīng)鹽酸胍乙啶變性得到人重組干擾素-γ。通過HIC 柱純化、折疊出高生物活性的產(chǎn)品。不同人尿表皮生長因子(EGF)也利用HIC 純化到了,均具有良好的生物活性。HIC 可將未經(jīng)離子交換柱的樣品純化。而RP-HPLC 則不能達(dá)到這一要求。西安口碑好多肽分離填料
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分離純化多肽的常用方法-分子排阻色譜 SEC 是利用多肽分子大小、形狀差異來分離純化多肽物質(zhì),特別對一些較大的聚集態(tài)的分子更為方便,如人重組生長(hgH)的分離,不同結(jié)構(gòu)、構(gòu)型的GH 在SEC 柱上分離行為完全不同,從而可分離不同構(gòu)型或在氨基酸序列上有微小差異的變異體,利用SEC 研究修飾化的PEG 的分離方法,此PEC 具有半衰期長、作用強(qiáng)的特點。一些分子量較大的肽或蛋白均可利用此法分離分析。 分離純化多肽的常用方法--離子交換色譜 IEXC 可在中性條件下,利用多肽的帶電性不同分離純化具有生物活性的多肽。其可分為陽離子柱與陰離子柱兩大類,還有一些新型樹脂,如大孔型樹脂、均孔型樹脂、離子交換纖維素、葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠樹脂等。在多肽類物質(zhì)的分離分析研究中,對多肽的性質(zhì)、洗脫劑、洗脫條件的研究較多,不同的多肽分離條件有所不同,特別是洗脫劑的離子強(qiáng)度、鹽濃度等對純化影響較大。Wu 等報道利用離子交換柱層析法,探討分離牛碳酸酐異構(gòu)體和牛血清白蛋白、雞血清白蛋白酶的提取條件,獲得了有價值的數(shù)據(jù)供今后此類物質(zhì)分離研究。合肥多肽分離填料制造廠家
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