作為時(shí)下的熱點(diǎn)技術(shù)，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨(dú)、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級(jí)別）中，使得每個(gè)反應(yīng)單元中盡可能含有1個(gè)模板分子，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行擴(kuò)增、檢測(cè)和分布統(tǒng)計(jì)，從而實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)分子的比較 計(jì)數(shù)。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術(shù)相比，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢(shì)：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標(biāo)；三是微反應(yīng)單元相互獨(dú)立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴(kuò)增產(chǎn)物間的相互干擾，準(zhǔn)確度和可重復(fù)性較高。數(shù)字以靈敏度和準(zhǔn)確度測(cè)量突變的變異程度、檢測(cè)稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數(shù)變?異狀態(tài)。美國醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測(cè)到熒光值對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)數(shù)字PCR技術(shù)min檢測(cè)下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。
在定量PCR時(shí)，我們常常糾結(jié)一個(gè)問題，究竟是相對(duì)定量還是***定量呢？如今，你無需糾結(jié)了，因?yàn)閿?shù)字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似，都是估計(jì)起始樣品中的核酸量，但它們有一個(gè)重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測(cè)定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù)，是對(duì)起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。
盡管我國dPCR行業(yè)起步較晚，但在國家鼓勵(lì)醫(yī)療器械創(chuàng)新的大背景下，以及精細(xì)醫(yī)療和個(gè)性化用藥等需求推動(dòng)下，dPCR成為了近年廣受關(guān)注的熱點(diǎn)領(lǐng)域，保持著穩(wěn)定快速的增長。近年來國內(nèi)誕生了如領(lǐng)航基因、新羿生物、銳訊生物、科維思、永諾生物、泛生子、思納福醫(yī)療等企業(yè)，開始與國外企業(yè)同臺(tái)競技。從市場角度看，北美依然是dPCR比較大的主導(dǎo)市場，其次是亞洲和歐洲。由于性疾病和的高發(fā)病率以及患者對(duì)這些疾病的早期診斷意識(shí)的提高，亞太地區(qū)將成為dPCR增長速度快的市場。伯樂、凱杰、賽默飛、羅氏、因美納等公司紛紛通過收購、投資等方式布局dPCR業(yè)務(wù)。在數(shù)字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無創(chuàng)產(chǎn)前篩查注冊(cè)證的申報(bào)。
目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度?？梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細(xì)管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計(jì)不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計(jì)算，從而解決了多個(gè)目標(biāo)分子存在于單個(gè)液滴中的可能性。影響dPCR定量結(jié)果的因素：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。法國微滴式數(shù)字PCR分析應(yīng)用
dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。美國醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
國產(chǎn)品牌市場份額的不斷擴(kuò)大，固然有、貿(mào)易戰(zhàn)等因素，但更關(guān)鍵在于，國產(chǎn)dPCR企業(yè)，立足本土，洞察客戶需求，不斷提供各種應(yīng)用場景下的解決方案。在儀器的自動(dòng)化程度上，領(lǐng)航基因、思納福醫(yī)療、達(dá)微生物分別推出全自動(dòng)一體機(jī)，領(lǐng)航基因更是領(lǐng)行業(yè)之先，推出了數(shù)字PCR工作站；在終端應(yīng)用開發(fā)上，繼科維思HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒（數(shù)字PCR法）獲得NMPA認(rèn)證后，2022年新羿生物推出較早基于數(shù)字PCR技術(shù)的NMPA獲證檢測(cè)試劑盒；領(lǐng)航基因基于dPCR推出血流檢測(cè)試劑盒和結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)試劑盒，并全速推進(jìn)試劑盒注冊(cè)臨床試驗(yàn)進(jìn)度；在熒光通道上，領(lǐng)航基因、思納福醫(yī)療、新羿生物大幅國外進(jìn)口品牌的2-4色熒光通道，分別推出7色、6色及5色熒光通道，進(jìn)一步提升樣本利用率和檢測(cè)靶標(biāo)覆蓋范圍，降低試驗(yàn)成本。美國醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司致力于精細(xì)化學(xué)品，是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)分為數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等，目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn)，為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競爭力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于精細(xì)化學(xué)品行業(yè)的發(fā)展。雙螺旋科學(xué)儀器憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來的聲譽(yù)和口碑，讓企業(yè)發(fā)展再上新高。