定量方法包括相對(duì)定量和定量，兩者的重要差異在于相對(duì)定量的結(jié)果是差異性的結(jié)果，涉及比較；而定量的結(jié)果是一個(gè)具體數(shù)值，對(duì)于基因表達(dá)量而言是基因的拷貝數(shù)，不涉及任何比較。相對(duì)定量首先需要確定一個(gè)內(nèi)參基因，內(nèi)參基因作用有檢測(cè)樣本材料中RNA是否降解、糾正樣本加樣的差異、校正cDNA合成速率差異及校正PCR抑制劑的影響，其本質(zhì)作用是利用內(nèi)參基因的Ct值對(duì)目的基因的Ct值進(jìn)行均一化處理，常用的內(nèi)參基因包括DH、β-actin、18S rRNA，使用的時(shí)候需要注意其序列必須是物種本身的特異序列，雖然其比較保守，但不同物種也會(huì)存在堿基差別。另外，相對(duì)定量需要確定參照物，因?yàn)樯婕氨容^，參照物選擇不同，所得的定量結(jié)果可能完全相反，經(jīng)常選擇的參照物一般是對(duì)照組或未處理組。dPCR可用于常規(guī)qPCR所需的標(biāo)準(zhǔn)品定量，具有計(jì)量學(xué)意義 。上海單通道qPCR儀廠家
PCR方法:PCR的原理在這里不需要進(jìn)一步解釋。多年來(lái)，研究人員基于此開(kāi)發(fā)了一系列衍生技術(shù)。當(dāng)前的PCR方法可分為三類(lèi)：終點(diǎn)PCR，qPCR和dPCR。終點(diǎn)PCR:端點(diǎn)PCR是原始，簡(jiǎn)單的PCR方法，并且仍然被使用。PCR反應(yīng)完成后，用戶(hù)只能通過(guò)凝膠電泳，毛細(xì)管電泳等方法檢測(cè)產(chǎn)物。終點(diǎn)PCR本身無(wú)法量化，因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)生的DNA數(shù)量可能無(wú)法反映初始情況。例如，不同樣品和序列之間的擴(kuò)增效率存在差異。DPCR通常更準(zhǔn)確。 qPCR可以輕松區(qū)分兩倍的濃度差異(例如5個(gè)拷貝和10個(gè)拷貝)，但是面對(duì)小的差異，它卻較弱。 dPCR理論上可以識(shí)別相差少于20%的拷貝數(shù)，例如5和6拷貝。該準(zhǔn)確度對(duì)于量化涉及染色體重排的基因的拷貝數(shù)或量化患者血液中的循環(huán)生物學(xué)指標(biāo)特別有用。由于dPCR相當(dāng)于在反應(yīng)結(jié)束時(shí)稀釋樣品并讀取數(shù)據(jù)，因此dPCR比qPCR對(duì)抑制劑的抵抗力更高。深圳熒光定量qPCR儀作用為了增加qPCR實(shí)驗(yàn)可靠性、重復(fù)性，需要制定統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行規(guī)范。
qPCR擴(kuò)增效率100%的理想條件下的PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物量呈指數(shù)倍增長(zhǎng)Yn=Y0×2^n（X0：初始模板量，n：PCR循環(huán)次數(shù)，Yn：第n次循環(huán)后的產(chǎn)物量）而實(shí)際PCR擴(kuò)增時(shí)可能存在模板質(zhì)量不佳引起的PCR擴(kuò)增抑制，DNA聚合酶的種類(lèi)及活性影響，非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)等情況，擴(kuò)增效率無(wú)法達(dá)到100%。擴(kuò)增初期，PCR產(chǎn)物指數(shù)倍增加，隨著PCR產(chǎn)物的累積，各種影響因素的疊加，PCR產(chǎn)物不再指數(shù)倍增加，每個(gè)循環(huán)后產(chǎn)物增加量恒定，進(jìn)入線性增長(zhǎng)期，dNTP消耗殆盡，酶逐漸失活，擴(kuò)增“停滯”，產(chǎn)物量恒定，進(jìn)入平臺(tái)期。非理想條件下的PCR反應(yīng)：PCR產(chǎn)物量Yn=Y0(1+Ex)^n（Ex：擴(kuò)增效率）。
Quantagene q225 系列熒光定量PCR 系統(tǒng)：快速 分秒必爭(zhēng)，43 分鐘完成40 循環(huán)qPCR 實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確 精細(xì)定量，數(shù)據(jù)可靠更勝一籌。節(jié)省 5-10 ul反應(yīng)體積，更少的試劑與樣品需求。小巧 輕巧身材，節(jié)約空間，更能輕松攜帶。的設(shè)計(jì)，出色的性能，為您的實(shí)驗(yàn)及研究提供超乎想象的便捷與準(zhǔn)確經(jīng)過(guò)嚴(yán)密設(shè)計(jì)的熱循環(huán)及光學(xué)系統(tǒng)在極大縮短運(yùn)行時(shí)間的同時(shí)，依舊能夠確保數(shù)據(jù)的精細(xì)。特制的小型96 孔板節(jié)約試劑和寶貴的樣品，并且保持較高的通量。 簡(jiǎn)潔清晰的PC 端操作軟件，不同階段的 qPCR 儀使用者都可以迅速掌握，實(shí)驗(yàn)過(guò)程更加輕松快捷。無(wú)需參比染料、無(wú)需定期校準(zhǔn)，更加簡(jiǎn)化的操作流程與減輕的維護(hù)負(fù)擔(dān)只為更好地專(zhuān)注于實(shí)驗(yàn)。qPCR在原有PCR基礎(chǔ)上與熒光檢測(cè)方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
原理：在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，通過(guò)熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)定每次PCR循環(huán)后產(chǎn)物總量。目的：實(shí)現(xiàn)定量而不止是定性分析。通過(guò)與內(nèi)參基因進(jìn)行對(duì)比，對(duì)樣品中的特定基因進(jìn)行相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算，以實(shí)現(xiàn)定量分析。qPCR的檢測(cè)方法有兩種，SYBRGreenl法和TaqMan探針?lè)?，下面介紹常用的SYBRGreenl法。原理：在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，使其特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。試劑及儀器：Hieff®QpcrSYBR®GreenMasterMix試劑(翌圣)和ABI7500Real-TimeSystem實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)需要五種關(guān)鍵試劑：PCR模板、DNA聚合酶、引物、脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）、PCR緩沖液。佛山高效qPCR儀型號(hào)
Quantagene q225系列qPCR 43分鐘完成實(shí)驗(yàn)，加3分鐘做完熔解曲線只需43分鐘即可完成40循環(huán)的常規(guī)qpcr實(shí)驗(yàn)。上海單通道qPCR儀廠家
PCR反應(yīng)需要五種關(guān)鍵試劑：PCR模板：也稱(chēng)為模板DNA，需要常規(guī)的試劑盒進(jìn)行提取。如基因組DNA（gDNA），cDNA和質(zhì)粒DNA。DNA聚合酶：所有PCR反應(yīng)都需要可在高溫下工作的DNA聚合酶。Taq聚合酶是一種常用的酶，它可以在70°C時(shí)以60個(gè)堿基/秒的速率整合核苷酸，并可以擴(kuò)增高達(dá)5kb的模板，使其適用于無(wú)特殊要求的標(biāo)準(zhǔn)PCR。引物：DNA聚合酶需要短序列的核苷酸，以指示它們需要在哪里開(kāi)始擴(kuò)增。在PCR中，這些序列稱(chēng)為引物，是單鏈DNA的短片段（約15-30個(gè)堿基）。脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）：是合成DNA新鏈的基礎(chǔ)，包括四個(gè)基本DNA核苷酸（dATP，dCTP，dGTP和dTTP）。PCR緩沖液：PCR緩沖液可確保在整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程中保持比較好條件。PCR緩沖液的主要成分包括氯化鎂（MGCl2，充當(dāng)DNA聚合酶的輔助因子），tris-HCl和氯化鉀（在反應(yīng)過(guò)程中保持穩(wěn)定的pH值）。目前市面上已經(jīng)有很多成熟的包含PCR緩沖液的Taq聚合酶。上海單通道qPCR儀廠家
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司公司是一家專(zhuān)門(mén)從事數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷(xiāo)售，是一家服務(wù)型企業(yè)，公司成立于2015-04-17，位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房。多年來(lái)為國(guó)內(nèi)各行業(yè)用戶(hù)提供各種產(chǎn)品支持。臻準(zhǔn),美國(guó)艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia目前推出了數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等多款產(chǎn)品，已經(jīng)和行業(yè)內(nèi)多家企業(yè)建立合作伙伴關(guān)系，目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。我們堅(jiān)持技術(shù)創(chuàng)新，把握市場(chǎng)關(guān)鍵需求，以重心技術(shù)能力，助力精細(xì)化學(xué)品發(fā)展。我們以客戶(hù)的需求為基礎(chǔ)，在產(chǎn)品設(shè)計(jì)和研發(fā)上面苦下功夫，一份份的不懈努力和付出，打造了臻準(zhǔn),美國(guó)艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia產(chǎn)品。我們從用戶(hù)角度，對(duì)每一款產(chǎn)品進(jìn)行多方面分析，對(duì)每一款產(chǎn)品都精心設(shè)計(jì)、精心制作和嚴(yán)格檢驗(yàn)。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司嚴(yán)格規(guī)范數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)品管理流程，確保公司產(chǎn)品質(zhì)量的可控可靠。公司擁有銷(xiāo)售/售后服務(wù)團(tuán)隊(duì)，分工明細(xì)，服務(wù)貼心，為廣大用戶(hù)提供滿(mǎn)意的服務(wù)。