PCR（PolymeraseChainReaction）技術(shù)，即聚合酶連反應(yīng)，是一種擴(kuò)大和復(fù)制目的片段DNA的技術(shù)，其發(fā)現(xiàn)對于生命科學(xué)的發(fā)展具有重要的意義。而3D數(shù)字PCR到底是什么鬼？它其實(shí)是出現(xiàn)的一款PCR儀，其具有對目的DNA分子做出定量的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)而提供的準(zhǔn)確性、靈敏度。應(yīng)用該技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對DNA進(jìn)行精確定量，精確度可通過復(fù)制次數(shù)實(shí)現(xiàn)。通過準(zhǔn)確性的進(jìn)行定量檢測基因，有助于臨床上在、病毒等疾病作參考。同時(shí)，其具有高通量，檢測速度快，成本相對低等優(yōu)點(diǎn)，為后期精細(xì)奠定基礎(chǔ)。拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達(dá)研究、二代測序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。珠三角微滴式數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
PCR常使用目標(biāo)序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實(shí)驗(yàn)過程所用試劑的兼容性較好，在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測時(shí)，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對相同樣品檢測時(shí)，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個(gè)微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時(shí)有被低估的風(fēng)險(xiǎn)，在高于拷貝數(shù)1000時(shí)有被高估的風(fēng)險(xiǎn)。dPCR在同一陣列上同時(shí)測量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時(shí)，需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。德國全自動(dòng)數(shù)字PCR原理?xiàng)钛惴宀┦繄?jiān)信數(shù)字PCR是可以應(yīng)用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術(shù)之一，這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。
基于數(shù)字PCR技術(shù)平臺，塔歌生物成功地開發(fā)了胎兒染色體非整倍體(T21,T18和T13)無創(chuàng)產(chǎn)前篩查試劑盒（數(shù)字PCR-NIPT），并已完成數(shù)百例臨床樣本驗(yàn)證。數(shù)字PCR-NIPT的陽性檢出率和NGS相似，且成本接近血清學(xué)，可以在上述應(yīng)急策略中取代血清學(xué)作為靈敏度和特異性更高的初篩方法，以有效提高陽性檢出率，降低需要復(fù)篩的假陽性樣本數(shù)和節(jié)省總的篩查成本。數(shù)字PCR應(yīng)用前景廣闊，可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創(chuàng)產(chǎn)前篩查、測序結(jié)果驗(yàn)證等領(lǐng)域。但目前，大多數(shù)醫(yī)院采購的數(shù)字PCR儀器是用于科研層面，在臨床應(yīng)用上仍處于起步階段，未得到普遍應(yīng)用。
數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù)，而是更好的補(bǔ)充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面，在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面，也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發(fā)了一系列試劑盒，并積極推進(jìn)注冊臨床試驗(yàn)；領(lǐng)航基因聚焦在血流 （膿毒癥）及呼吸道 領(lǐng)域，相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒；銳訊生物聚焦于檢測，2020年其產(chǎn)品獲得FDA緊急授權(quán)。除此之外，在公共衛(wèi)生領(lǐng)域，國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等，也推出多種檢測試劑盒。目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學(xué)顯微鏡觀測為主。
現(xiàn)有dPCR分析方法采用熒光探針和基于光的檢測方法來鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物。這些方法要求足夠的靶分子擴(kuò)增以產(chǎn)生足以被檢測到的信號，但可能會導(dǎo)致額外的錯(cuò)誤或偏差，因此，希望能夠提供一種改進(jìn)的、用于檢測樣品內(nèi)感興趣的核酸的方法，其采用替代性分析方法，具有提高的準(zhǔn)確度和精確度，并且其具有可以與基于dPCR的方法關(guān)聯(lián)使用的靈敏度。dPCR還在樣品內(nèi)進(jìn)行單一反應(yīng)，但是所述樣品被分離成大量的分區(qū)(partition)，并且所述反應(yīng)在每個(gè)分區(qū)中單獨(dú)進(jìn)行。這種分離允許對核酸量進(jìn)行靈敏的測量。DPCR已被證明可有效用于研究基因序列中的變異，例如拷貝數(shù)變異或點(diǎn)突變。數(shù)字以靈敏度和準(zhǔn)確度測量突變的變異程度、檢測稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數(shù)變?異狀態(tài)。深圳賽默飛數(shù)字PCR油滴制造
全自動(dòng)數(shù)字PCR平臺，讓數(shù)字PCR真正邁入新時(shí)代，助推數(shù)字PCR普及應(yīng)用。珠三角微滴式數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
Drop-off實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)針對相同擴(kuò)增子的TaqMan探針：與野生型序列互補(bǔ)而與突變位點(diǎn)不發(fā)生互補(bǔ)的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補(bǔ)的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標(biāo)雜交，產(chǎn)生雙重陽性信號（如圖1B，藍(lán)色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個(gè)核苷酸的突變也會阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標(biāo)基因進(jìn)行退火，從而得到一個(gè)陽性信號。珠三角微滴式數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司公司是一家專門從事數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售，是一家服務(wù)型企業(yè)，公司成立于2015-04-17，位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房。多年來為國內(nèi)各行業(yè)用戶提供各種產(chǎn)品支持。臻準(zhǔn),美國艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia目前推出了數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等多款產(chǎn)品，已經(jīng)和行業(yè)內(nèi)多家企業(yè)建立合作伙伴關(guān)系，目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。我們堅(jiān)持技術(shù)創(chuàng)新，把握市場關(guān)鍵需求，以重心技術(shù)能力，助力精細(xì)化學(xué)品發(fā)展。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司每年將部分收入投入到數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)品開發(fā)工作中，也為公司的技術(shù)創(chuàng)新和人材培養(yǎng)起到了很好的推動(dòng)作用。公司在長期的生產(chǎn)運(yùn)營中形成了一套完善的科技激勵(lì)政策，以激勵(lì)在技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品改進(jìn)等。廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司注重以人為本、團(tuán)隊(duì)合作的企業(yè)文化，通過保證數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀產(chǎn)品質(zhì)量合格，以誠信經(jīng)營、用戶至上、價(jià)格合理來服務(wù)客戶。建立一切以客戶需求為前提的工作目標(biāo)，真誠歡迎新老客戶前來洽談業(yè)務(wù)。