dPCR的測量結(jié)果通常表示為含量,即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比,而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。目前市場上可購買到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),以qPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以拷貝數(shù)(單倍體基因組當(dāng)量)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來表示特性量;以dPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式,會造成測量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分?jǐn)?shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關(guān)系需要轉(zhuǎn)化,才能得到單位一致,數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分?jǐn)?shù)。dPCR的結(jié)果統(tǒng)計方式有2種,一種是采用標(biāo)記多種顏色,另一種采用概率統(tǒng)計的數(shù)據(jù)處理方法。廣東數(shù)字PCR市場前景
在熒光定量PCR應(yīng)用已經(jīng)如此的情況下,緣何數(shù)字PCR仍然能橫空出世?中心點在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場應(yīng)用提供了非常重要的檢測工具支撐,但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定量,屬于相對定量,操作較為復(fù)雜,且終端用戶對其結(jié)果的重復(fù)性、靈敏性、精密度、分辨率、對PCR反應(yīng)抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數(shù)字PCR通過將反應(yīng)體系進行有限稀釋至成千上萬的反應(yīng)單元中,實現(xiàn)了核酸靶標(biāo)的單分子擴增。PCR擴增結(jié)束后,基于終點法對陽性液滴數(shù)和總液滴數(shù)進行計數(shù),結(jié)合泊松分布原理,從而實現(xiàn)對起始樣本的定量。其極大地簡化了操作步驟,并且大幅提高了檢測性能,尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測上(靈敏性可達0.001-0.0001%),其優(yōu)異的性能得到了終端用戶的認(rèn)可。珠三角全自動數(shù)字PCR數(shù)字PCR主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法。
數(shù)字PCR技術(shù)流分類目前,dPCR的基本方法都已經(jīng)建立,根據(jù)反應(yīng)單元的不同形式,主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統(tǒng)。微液滴制備的方法,目前主流的有四種:1)芯片微孔物理分割法,俗稱物理分隔法,公司有Fluidgm,Qiagen,Roche,ThermoFisher,;2)液滴分割法,俗稱油包水,代替公司有Bio-Rad;3)雜交式芯片液滴法,公司有Stilla;4)注射振動制滴法。PS:芯片式物理分割技術(shù)所有已經(jīng)過期,目前有不少公司在這個技術(shù)的基礎(chǔ)上進行開發(fā),例如羅氏。
數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(digitalpolymerchainreaction,dPCR)技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢,梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測與溯源技術(shù)(標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))方面的進展和發(fā)展趨勢,以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步:樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴增和樣品的檢測。對于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng),各個部件之間仍然有較大的改進空間,要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的,而且有持續(xù)研究的價值。表1中總結(jié)了部分常見的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型,以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。在dPCR中,樣品被分區(qū),使得樣品內(nèi)單個的核酸分子被定位并被集中在許多分離的區(qū)域內(nèi)。
數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量,其結(jié)果基于統(tǒng)計的方法進行定量,增加反應(yīng)單元數(shù)量(統(tǒng)計樣本量),可以增加其檢測的容量和動態(tài)檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態(tài)范圍,同時減小一個反應(yīng)單元中包含多個分子所造成的誤差,達到提高靈敏度和準(zhǔn)確度。影響dPCR定量結(jié)果的因素包括:儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達方式。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定,分散體積和結(jié)果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優(yōu)化得到。國產(chǎn)dPCR企業(yè)在上述應(yīng)用領(lǐng)域不斷與伯樂、賽默飛、羅氏、凱杰、因美納等頭部企業(yè)展開競爭,搶占市場份額。深圳全自動數(shù)字PCR市場前景
dPCR可直接溯源SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究,一次可識別不同的轉(zhuǎn)基因區(qū)域。廣東數(shù)字PCR市場前景
了解泊松分布,我們先要從二項式分布說起,二項式分布是一個離散概率分布,它給出了m次試驗中k次成功的可能性,每次試驗的概率為p,例如當(dāng)擲骰子時,二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中,投擲骰子類似于將一個目標(biāo)實體隨機“投擲”到一組分區(qū)中,當(dāng)目標(biāo)落在選定的分區(qū)中時,就是成功。如果有n個分區(qū),并且分區(qū)過程是完全隨機的,則目標(biāo)出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗重復(fù)m次,樣品中的每個分子一次。如下所示的二項式分布給出了k個成功的概率,即所選分區(qū)恰好包含k個分子的概率。數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū)。當(dāng)n很大,并且嘗試成功的概率(1/n)很小時,二項分布可以近似為泊松分布。廣東數(shù)字PCR市場前景
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司是我國數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀專業(yè)化較早的有限責(zé)任公司(自然)之一,公司始建于2015-04-17,在全國各個地區(qū)建立了良好的商貿(mào)渠道和技術(shù)協(xié)作關(guān)系。公司承擔(dān)并建設(shè)完成精細(xì)化學(xué)品多項重點項目,取得了明顯的社會和經(jīng)濟效益。雙螺旋科學(xué)儀器將以精良的技術(shù)、優(yōu)異的產(chǎn)品性能和完善的售后服務(wù),滿足國內(nèi)外廣大客戶的需求。