數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來(lái)定量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測(cè)到熒光值對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過(guò)PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒(méi)有模板的反應(yīng)器就沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。Drop-off數(shù)字PCR檢測(cè)方法的**主要優(yōu)勢(shì)是能夠能夠在一個(gè)反應(yīng)中檢測(cè)到基因組序列范圍短的同源基因突變。法國(guó)數(shù)字PCR分析應(yīng)用
數(shù)字PCR產(chǎn)品的發(fā)展，為不同場(chǎng)景下的多樣化核酸檢測(cè)需求提供了新的思路，尤其是在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面，在 性疾病早期檢測(cè)、病癥的液體活檢、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢查等領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。實(shí)現(xiàn) 性疾病早期高效檢測(cè)——以病毒為例，有病毒檢測(cè)、和臨床樣本病毒載量評(píng)估He監(jiān)測(cè)環(huán)境病毒載量；二代熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)是目前病毒檢測(cè)的"金標(biāo)準(zhǔn)"，但由于病毒探針結(jié)合位點(diǎn)突變、樣本病毒載量不足等原因，在臨床檢測(cè)過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)假陰性結(jié)果，由于數(shù)字PCR具有更高的靈敏度、精細(xì)度，以及其適合痕量樣本檢測(cè)的特性，能夠檢測(cè)出熒光定量PCR檢測(cè)過(guò)程中錯(cuò)過(guò)的 ，可作為后者的補(bǔ)充。在人群篩查及臨床診療中，為科學(xué)選取采樣方式，需要評(píng)估不同臨床樣本病毒載量，如鼻咽拭子、血尿、糞便、肺泡灌洗液等，由于數(shù)字PCR可提供一定程度上量化指標(biāo)，為采樣方法的選取提供了參考，從而提高檢出率。在外防輸入的戰(zhàn)略要求下，環(huán)境病毒檢測(cè)工作尤為重要，數(shù)字PCR可對(duì)低核酸豐度樣本進(jìn)行有效檢測(cè)，包括從不同環(huán)境中取樣的樣本，如病房、醫(yī)院衛(wèi)生間、實(shí)驗(yàn)室等等，在病情防控中起到了不可忽視的作用。此外，數(shù)字PCR的應(yīng)用場(chǎng)景還有病程不同階段的病毒載量評(píng)估、核酸參考品制備、抗病毒藥物研發(fā)等環(huán)節(jié)。全自動(dòng)數(shù)字PCR試劑盒dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查有望成為數(shù)字PCR在臨床快速落地的锏應(yīng)用。首先，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查領(lǐng)域?qū)τ诩骖櫝杀?、?zhǔn)確性、速度的創(chuàng)新技術(shù)的需求還未滿足。其次，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查市場(chǎng)空間龐大，雖說(shuō)中國(guó)每年新生兒的增長(zhǎng)速度正在放緩，但每年仍有超過(guò)1000萬(wàn)的新生兒，帶來(lái)了巨大的想象空間。2022年6月，鄭大一附院遺傳與產(chǎn)前診斷中心、塔歌生物聯(lián)合在JournalofTranslationalMedicine（影響因子5.531）雜志上發(fā)表文章，驗(yàn)證了數(shù)字PCR作為T21,T18和T13產(chǎn)前篩查方法的可行性，這是世界上報(bào)道在真實(shí)臨床條件下通過(guò)盲檢實(shí)現(xiàn)一管反應(yīng)可從孕婦血漿樣本中同時(shí)檢測(cè)出T21、T18和T13的數(shù)字PCR無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查試劑盒。文章顯示，塔歌生物胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查數(shù)字PCR試劑盒總體篩查的靈敏度為100%，特異性為95.12%，均優(yōu)于血清學(xué)篩查。除準(zhǔn)確率高之外，塔歌生物的產(chǎn)品還擁有成本低、操作簡(jiǎn)便，及檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì)，可以加速無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查在各級(jí)醫(yī)院，特別是基層地區(qū)普遍落地，助力中國(guó)出生缺陷防控。
數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢(shì)而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢(shì)，梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)與溯源技術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）方面的進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴(kuò)增過(guò)程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴(kuò)增和樣品的檢測(cè)。對(duì)于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個(gè)部件之間仍然有較大的改進(jìn)空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價(jià)值。表1中總結(jié)了部分常見(jiàn)的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對(duì)在硬件、便攜性、性價(jià)比和自動(dòng)化程度上的比較。在數(shù)字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查注冊(cè)證的申報(bào)。
常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于樣品測(cè)定在各種條件上不會(huì)完全一致，會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可以進(jìn)行定量。如何在雙通道設(shè)置及雙探針標(biāo)記的情況下實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)?不同位點(diǎn)的雙探針檢測(cè)體系中引物和探針采用不同的終濃度，這樣陽(yáng)性微滴的終點(diǎn)FAM/HEX熒光信號(hào)強(qiáng)度就會(huì)不同，利用陽(yáng)性微滴不同的“分簇(cluster)”來(lái)區(qū)分不同的突變位點(diǎn)。采用對(duì)應(yīng)的KRAS野生型和突變型細(xì)胞系對(duì)雙重ddPCR檢測(cè)體系的性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示除了Q61H位點(diǎn)外，其他位點(diǎn)的檢測(cè)體系在54C的情況下均能很好的區(qū)分4個(gè)明顯的cluster。dPCR被稱作第三代PCR技術(shù)，但dPCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。華南地區(qū)數(shù)字PCR技術(shù)
目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學(xué)顯微鏡觀測(cè)為主。法國(guó)數(shù)字PCR分析應(yīng)用
由于現(xiàn)有的商業(yè)化數(shù)字PCR設(shè)備在物理上只設(shè)置了2個(gè)檢測(cè)通道，所以存在一個(gè)明顯的短板：不能同時(shí)進(jìn)行多個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)。在樣品多位點(diǎn)的檢測(cè)中，就需要更多的起始樣品，但臨床上組織的樣品非常有限。相比之下熒光定量PCR儀上就很容易實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)。為了考察利用數(shù)字PCR實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)的可能性，英國(guó)TheInstituteofCancerResearch的研究人員以非小細(xì)胞肺相關(guān)的KRAS基因?yàn)闄z測(cè)對(duì)象，在Bio-Rad的數(shù)字PCR系統(tǒng)上通過(guò)3個(gè)三重ddPCR檢測(cè)體系來(lái)實(shí)現(xiàn)9個(gè)KRAS突變位點(diǎn)的檢測(cè)。法國(guó)數(shù)字PCR分析應(yīng)用
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司致力于精細(xì)化學(xué)品，是一家服務(wù)型的公司。雙螺旋科學(xué)儀器致力于為客戶提供良好的數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀，一切以用戶需求為中心，深受廣大客戶的歡迎。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于精細(xì)化學(xué)品行業(yè)的發(fā)展。雙螺旋科學(xué)儀器秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念，全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。