數(shù)字PCR技術的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術，而是更好的補充和完善現(xiàn)有技術平臺。數(shù)字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面，在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領域展現(xiàn)出良好的應用前景。國產數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應用方面，也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發(fā)了一系列試劑盒，并積極推進注冊臨床試驗；領航基因聚焦在血流 （膿毒癥）及呼吸道 領域，相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒；銳訊生物聚焦于檢測，2020年其產品獲得FDA緊急授權。除此之外，在公共衛(wèi)生領域，國產數(shù)字PCR企業(yè)針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等，也推出多種檢測試劑盒。在dPCR中，樣品被分區(qū)，使得樣品內單個的核酸分子被定位并被集中在許多分離的區(qū)域內。深圳賽默飛數(shù)字PCR原理
引物設計（DesignPrimers）：引物長度（PrimerLength）：18-25個堿基之間。短的引物更易于同靶序列結合，但過短的引物也更可能同基因組上的多個區(qū)域相結合而產生非特異性擴增產物。更長的引物會提高同靶序列結合的特異性，但過長的引物（>30bp）同靶序列結合速度變慢，降低結合率。引物長度和組成直接影響引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火溫度（AnnealingTemperatures）。引物的組成——GC%含量（GCContent）：指引物總堿基中G和C堿基數(shù)量的百分比，該值應在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高，推薦使用較高Tm值的引物。華南地區(qū)全自動數(shù)字PCR市場前景數(shù)字PCR的兩大應用場景在于基因檢測、無創(chuàng)出生缺陷篩查。
了解泊松分布，我們先要從二項式分布說起，二項式分布是一個離散概率分布，它給出了m次試驗中k次成功的可能性，每次試驗的概率為p，例如當擲骰子時，二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中，投擲骰子類似于將一個目標實體隨機“投擲”到一組分區(qū)中，當目標落在選定的分區(qū)中時，就是成功。如果有n個分區(qū)，并且分區(qū)過程是完全隨機的，則目標出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗重復m次，樣品中的每個分子一次。如下所示的二項式分布給出了k個成功的概率，即所選分區(qū)恰好包含k個分子的概率。數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū)。當n很大，并且嘗試成功的概率(1/n)很小時，二項分布可以近似為泊松分布。
基于微滴的QX100dPCR儀，利用油包水技術，將樣品平均分配到20000個微滴油包水中，利用微滴分析儀對微滴進行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀，在高壓氣體驅動下，將每個標準反應體系分割成包含100萬至1000萬個皮升級別微滴的反應乳液。數(shù)字PCR就形成了2大派別，芯片式和微滴式。不論是哪種數(shù)字PCR，其原理都是有限稀釋，終點PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標準PCR反應體系，平均分配成幾萬個PCR反應，分配到芯片或微滴中，使每個反應中盡可能含有一個模板分子，進行單分子模板PCR反應，通過讀取熒光信號的有或無進行計數(shù)，經過統(tǒng)計學泊松分布的校準進行定量。數(shù)字PCR適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域。
數(shù)字PCR系統(tǒng)通過其獨特的微流體陣列式芯片板（MAP）技術，提供強大而易于使用的數(shù)字PCR體驗。這種專有技術可實現(xiàn)對樣品進行一致的自動腔室化，可將一份樣品腔室化至20,000個微反應室，其變異系數(shù)（CV）達到比較好的<1%。與其它數(shù)字PCR系統(tǒng)不同，MAP技術不使用乳液或其它基于液滴的方法對反應進行腔室化。而是利用分配通道將試劑遞送至微反應室，具有高精密度和一致性。此外，QuantStudioAbsoluteQ系統(tǒng)可分析加載樣品的95%以上，確保獲得高度準確的數(shù)字PCR結果。從市場規(guī)模來看，目前數(shù)字PCR市場規(guī)模并不大，全球約1.5億至2.5億美元。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR油滴制造
通過創(chuàng)新技術微流控芯片，讓數(shù)字PCR單反應耗材價格進入個位數(shù)，實現(xiàn)了新的進步，也降低開發(fā)難度。深圳賽默飛數(shù)字PCR原理
數(shù)字聚合酶鏈式反應（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術因具有高靈敏度、受基質干擾少等優(yōu)勢而被廣用于轉基因食品檢測。本研究綜述了數(shù)字PCR技術的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢，梳理了數(shù)字PCR技術在轉基因檢測與溯源技術（標準物質）方面的進展和發(fā)展趨勢，以期為轉基因食品檢測領域提供參考依據。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴增和樣品的檢測。對于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個部件之間仍然有較大的改進空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價值。表1中總結了部分常見的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。深圳賽默飛數(shù)字PCR原理
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