數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù)，而是更好的補(bǔ)充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺(tái)。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場(chǎng)景下的多樣化核酸檢測(cè)需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測(cè)方面。國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面，也不斷“攻城略地”。數(shù)字PCR作為當(dāng)下靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù)，盡管目前國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)異軍突起，在臨床市場(chǎng)中實(shí)現(xiàn)了彎道超車，但未來仍然需要聚焦客戶需求，不斷夯實(shí)底層創(chuàng)新，同時(shí)在檢測(cè)成本、自動(dòng)化、試劑盒申報(bào)注冊(cè)、出海國(guó)際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國(guó)際局勢(shì)，波譎云詭。在百年未有之大變局，實(shí)現(xiàn)中華民族的偉大復(fù)興，需要國(guó)內(nèi)企業(yè)瞄準(zhǔn)技術(shù)高地，以爭(zhēng)分奪秒的精神，解決技術(shù)"卡脖子"的難題，不斷攻堅(jiān)克難，自主創(chuàng)新，在與國(guó)際品牌的同臺(tái)競(jìng)技中，彰顯中國(guó)實(shí)力。在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí)，通常直接參照qPCR的方法。微滴式數(shù)字PCR油滴制造
基于微滴的QX100dPCR儀，利用油包水技術(shù)，將樣品平均分配到20000個(gè)微滴油包水中，利用微滴分析儀對(duì)微滴進(jìn)行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀，在高壓氣體驅(qū)動(dòng)下，將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分割成包含100萬至1000萬個(gè)皮升級(jí)別微滴的反應(yīng)乳液。數(shù)字PCR就形成了2大派別，芯片式和微滴式。不論是哪種數(shù)字PCR，其原理都是有限稀釋，終點(diǎn)PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系，平均分配成幾萬個(gè)PCR反應(yīng)，分配到芯片或微滴中，使每個(gè)反應(yīng)中盡可能含有一個(gè)模板分子，進(jìn)行單分子模板PCR反應(yīng)，通過讀取熒光信號(hào)的有或無進(jìn)行計(jì)數(shù)，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)泊松分布的校準(zhǔn)進(jìn)行定量。德國(guó)數(shù)字PCR性能特點(diǎn)數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣，除了可應(yīng)用于進(jìn)行突變的檢測(cè)以外，也可運(yùn)用于基因擴(kuò)增的檢測(cè)。
dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。目前市場(chǎng)上可購(gòu)買到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以qPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以拷貝數(shù)（單倍體基因組當(dāng)量）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來表示特性量；以dPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會(huì)造成測(cè)量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分?jǐn)?shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關(guān)系需要轉(zhuǎn)化，才能得到單位一致，數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
數(shù)字PCR平臺(tái)的評(píng)價(jià)指標(biāo)有：分割單元數(shù)，熒光通道數(shù)，操作復(fù)雜性和污染風(fēng)險(xiǎn)。但是重要的是檢測(cè)準(zhǔn)確性，評(píng)估數(shù)字PCR平臺(tái)的一種方法是使用多個(gè)數(shù)字PCR平臺(tái)互相驗(yàn)證，另一種方法是使用定值準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。目前的三代的PCR技術(shù)各有各的優(yōu)缺點(diǎn)，也各有各的應(yīng)用領(lǐng)域，并不是一代取代一代的關(guān)系。技術(shù)的不斷進(jìn)步給PCR技術(shù)注入了新的活力，使其能解鎖一個(gè)又一個(gè)的應(yīng)用方向，使核酸檢測(cè)更方便、更準(zhǔn)確。目前dPCR儀器的價(jià)格仍然十分昂貴，但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進(jìn)以及使用較便宜的材料，聚合成更小的體積[556]，其價(jià)格將會(huì)不斷的降低，使其應(yīng)用到更多的檢測(cè)中。3D數(shù)字PCR是基于納米流體芯片進(jìn)行檢測(cè)，通過一次檢測(cè)，將樣品分到數(shù)千個(gè)單獨(dú)的PCR。
作為時(shí)下的熱點(diǎn)技術(shù)，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨(dú)、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級(jí)別）中，使得每個(gè)反應(yīng)單元中盡可能含有1個(gè)模板分子，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行擴(kuò)增、檢測(cè)和分布統(tǒng)計(jì)，從而實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)分子的比較 計(jì)數(shù)。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場(chǎng)上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術(shù)相比，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢(shì)：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標(biāo)；三是微反應(yīng)單元相互獨(dú)立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴(kuò)增產(chǎn)物間的相互干擾，準(zhǔn)確度和可重復(fù)性較高。dPCR儀器在操作中集成了前處理以減少手工移液和樣品轉(zhuǎn)移的操作，增加了通量，并在價(jià)格上具有優(yōu)勢(shì)。蘇州數(shù)字PCR儀器
數(shù)字PCR作為研發(fā)階段的驗(yàn)證方案之一。微滴式數(shù)字PCR油滴制造
數(shù)字PCR的引物和探針設(shè)計(jì)規(guī)則同熒光定量PCR是類似的，具體規(guī)則如下：1、查找和選擇目標(biāo)序列設(shè)計(jì)引物和探針的第一步是得到感興趣基因的核酸序列。找到基因保守區(qū)域：基因的保守區(qū)域是指來自同一屬/種/亞型的、在某個(gè)基因上堿基序列差別很小或沒有差別的區(qū)域。根據(jù)需要，使用ClustalX或ClustalW等軟件對(duì)齊屬于同一屬/種/亞型的基因的一組序列，在對(duì)齊序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，并確保引物結(jié)合位點(diǎn)處的保守序列與其它非待檢測(cè)的屬/種/亞型的堿基序列具有較大的差異。擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度（AmpliconLength）：可在75-200bp之間（產(chǎn)物長(zhǎng)度=下游引物位置-上游引物位置+1）。微滴式數(shù)字PCR油滴制造
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司一直專注于儀器儀表批發(fā);商品批發(fā)貿(mào)易（許可審批類商品除外）;商品零售貿(mào)易（許可審批類商品除外）;教學(xué)設(shè)備的研究開發(fā);辦公設(shè)備耗材批發(fā);生物技術(shù)開發(fā)服務(wù);生物技術(shù)推廣服務(wù);計(jì)算機(jī)批發(fā);生物技術(shù)轉(zhuǎn)讓服務(wù);農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;水處理設(shè)備的研究、開發(fā);食品科學(xué)技術(shù)研究服務(wù);環(huán)保設(shè)備批發(fā);辦公設(shè)備批發(fā);，是一家精細(xì)化學(xué)品的企業(yè)，擁有自己**的技術(shù)體系。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工，為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長(zhǎng)空間，為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù)，深受員工與客戶好評(píng)。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括：數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營(yíng)宗旨，深受客戶好評(píng)。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù)，我們相信誠(chéng)實(shí)正直、開拓進(jìn)取地為公司發(fā)展做正確的事情，將為公司和個(gè)人帶來共同的利益和進(jìn)步。經(jīng)過幾年的發(fā)展，已成為數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀行業(yè)出名企業(yè)。