20世紀(jì)末，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digitalPCR，dPCR)的概念，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個單元至少包含一個拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板)，在每個反應(yīng)單元中分別對目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)束后對各個反應(yīng)單元的熒光信號進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。PCR實(shí)際上是一個在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)，擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。檢測結(jié)果部分為陽性，部分為陰性，之后進(jìn)行分子數(shù)統(tǒng)計(jì)，不需做標(biāo)曲。華南地區(qū)雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR熒光通道
根據(jù)泊松分布的定義和適用條件可知，如果我們設(shè)微液滴總數(shù)為N，投入的靶序列拷貝數(shù)為M，那么“每個微液滴中的靶序列拷貝數(shù)”的概率分布是近似滿足泊松分布的。理解之前，首先要明確一點(diǎn)，在檢測的過程中，并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點(diǎn)，這個反應(yīng)當(dāng)中就有幾個目標(biāo)基因的拷貝。因?yàn)槟繕?biāo)基因的片段，在微滴當(dāng)中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進(jìn)不進(jìn)的概率相等，并且相互獨(dú)立）。所以，一個發(fā)光的微滴中，可能有一個或者三個四個，甚至更多個目標(biāo)基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對一的對應(yīng)關(guān)系。全自動數(shù)字PCR儀器模板 DNA 量越多，熒光達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)越少，即 Ct 值越小。
二項(xiàng)式分布是一個離散概率分布，它給出了m次試驗(yàn)中k次成功的可能性，每次試驗(yàn)的概率為p，例如當(dāng)擲骰子時，二項(xiàng)分布給出了在10次試驗(yàn)中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中，投擲骰子類似于將一個目標(biāo)實(shí)體隨機(jī)“投擲”到一組分區(qū)中，當(dāng)目標(biāo)落在選定的分區(qū)中時，就是成功。如果有n個分區(qū)，并且分區(qū)過程是完全隨機(jī)的，則目標(biāo)出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗(yàn)重復(fù)m次，樣品中的每個分子一次。更多關(guān)于PCR的相關(guān)信息，歡迎咨詢廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司。
數(shù)字PCR平臺的評價指標(biāo)有：分割單元數(shù)，熒光通道數(shù)，操作復(fù)雜性和污染風(fēng)險。但是重要的是檢測準(zhǔn)確性，評估數(shù)字PCR平臺的一種方法是使用多個數(shù)字PCR平臺互相驗(yàn)證，另一種方法是使用定值準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。目前的三代的PCR技術(shù)各有各的優(yōu)缺點(diǎn)，也各有各的應(yīng)用領(lǐng)域，并不是一代取代一代的關(guān)系。技術(shù)的不斷進(jìn)步給PCR技術(shù)注入了新的活力，使其能解鎖一個又一個的應(yīng)用方向，使核酸檢測更方便、更準(zhǔn)確。目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴，但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進(jìn)以及使用較便宜的材料，聚合成更小的體積[556]，其價格將會不斷的降低，使其應(yīng)用到更多的檢測中。無創(chuàng)產(chǎn)前篩查有望成為數(shù)字PCR在臨床快速落地的應(yīng)用。
常規(guī)PCR和實(shí)時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴(kuò)增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動力學(xué)影響，可以進(jìn)行定量。如何在雙通道設(shè)置及雙探針標(biāo)記的情況下實(shí)現(xiàn)多重檢測?不同位點(diǎn)的雙探針檢測體系中引物和探針采用不同的終濃度，這樣陽性微滴的終點(diǎn)FAM/HEX熒光信號強(qiáng)度就會不同，利用陽性微滴不同的“分簇(cluster)”來區(qū)分不同的突變位點(diǎn)。采用對應(yīng)的KRAS野生型和突變型細(xì)胞系對雙重ddPCR檢測體系的性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示除了Q61H位點(diǎn)外，其他位點(diǎn)的檢測體系在54C的情況下均能很好的區(qū)分4個明顯的cluster。楊雁峰博士堅(jiān)信數(shù)字PCR是可以應(yīng)用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術(shù)之一，這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。珠三角全自動數(shù)字PCR品牌
數(shù)字PCR是定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。華南地區(qū)雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR熒光通道
naica®六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于crystal微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴(kuò)增，每個樣本孔可實(shí)現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進(jìn)行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標(biāo)基因的一定程度上拷貝數(shù)濃度，融合傳統(tǒng)微滴式和芯片式優(yōu)勢，被稱為下一代數(shù)字PCR技術(shù)。只需一步移液操作，將PCR反應(yīng)液加載于創(chuàng)新型微流控芯片，naica®六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)即可自動生成單層平鋪的2D微滴陣列，隨后對每個微滴進(jìn)行溫度均勻一致的PCR擴(kuò)增后，進(jìn)行六通道熒光信號采集，計(jì)數(shù)陰陽性微滴，通過泊松分布計(jì)算獲得靶標(biāo)基因一定程度上拷貝數(shù)濃度。華南地區(qū)雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR熒光通道
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司在數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位，無論是產(chǎn)品還是服務(wù)，其高水平的能力始終貫穿于其中。公司始建于2015-04-17，在全國各個地區(qū)建立了良好的商貿(mào)渠道和技術(shù)協(xié)作關(guān)系。雙螺旋科學(xué)儀器以數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀為主業(yè)，服務(wù)于精細(xì)化學(xué)品等領(lǐng)域，為全國客戶提供先進(jìn)數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀。多年來，已經(jīng)為我國精細(xì)化學(xué)品行業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)濟(jì)等的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。