數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢(shì)而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢(shì)，梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)與溯源技術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）方面的進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴(kuò)增過(guò)程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴(kuò)增和樣品的檢測(cè)。對(duì)于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個(gè)部件之間仍然有較大的改進(jìn)空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價(jià)值。表1中總結(jié)了部分常見(jiàn)的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對(duì)在硬件、便攜性、性價(jià)比和自動(dòng)化程度上的比較。通過(guò)創(chuàng)新技術(shù)微流控芯片，讓數(shù)字PCR單反應(yīng)耗材價(jià)格進(jìn)入個(gè)位數(shù)，實(shí)現(xiàn)了新的進(jìn)步，也降低開(kāi)發(fā)難度。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR系統(tǒng)
數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量，其結(jié)果基于統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行定量，增加反應(yīng)單元數(shù)量（統(tǒng)計(jì)樣本量），可以增加其檢測(cè)的容量和動(dòng)態(tài)檢測(cè)線性范圍達(dá)到和qPCR相近的動(dòng)態(tài)范圍，同時(shí)減小一個(gè)反應(yīng)單元中包含多個(gè)分子所造成的誤差，達(dá)到提高靈敏度和準(zhǔn)確度。影響dPCR定量結(jié)果的因素包括：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定，分散體積和結(jié)果表達(dá)方式需要實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中優(yōu)化得到。進(jìn)口數(shù)字PCR原理數(shù)字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一種核酸分子定量技術(shù)。
ThermoFisherQuantStudio3D是另一個(gè)經(jīng)典的芯片式數(shù)字PCR平臺(tái)，其基本的檢測(cè)流程是：將反應(yīng)液加入到涂布器中，通過(guò)涂布器將反應(yīng)液均勻涂布在有20000個(gè)微孔的芯片上，將芯片放在PCR儀上擴(kuò)增，將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號(hào)。操作較為復(fù)雜，整個(gè)過(guò)程在封閉的芯片中進(jìn)行，污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。STILLANaica是一個(gè)較新的數(shù)字PCR平臺(tái)，基本的檢測(cè)流程是：將反應(yīng)液加入芯片，將芯片放入微滴生成擴(kuò)增系統(tǒng)，生成30,000個(gè)微滴單層平鋪于芯片中，PCR擴(kuò)增在芯片上完成。然后將擴(kuò)增后的芯片轉(zhuǎn)移至微滴閱讀分析系統(tǒng)，采取拍照的方式讀取熒光信號(hào)。由于整個(gè)過(guò)程在封閉的芯片中進(jìn)行，污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。
現(xiàn)有dPCR分析方法采用熒光探針和基于光的檢測(cè)方法來(lái)鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物。這些方法要求足夠的靶分子擴(kuò)增以產(chǎn)生足以被檢測(cè)到的信號(hào)，但可能會(huì)導(dǎo)致額外的錯(cuò)誤或偏差，因此，希望能夠提供一種改進(jìn)的、用于檢測(cè)樣品內(nèi)感興趣的核酸的方法，其采用替代性分析方法，具有提高的準(zhǔn)確度和精確度，并且其具有可以與基于dPCR的方法關(guān)聯(lián)使用的靈敏度。dPCR還在樣品內(nèi)進(jìn)行單一反應(yīng)，但是所述樣品被分離成大量的分區(qū)(partition)，并且所述反應(yīng)在每個(gè)分區(qū)中單獨(dú)進(jìn)行。這種分離允許對(duì)核酸量進(jìn)行靈敏的測(cè)量。DPCR已被證明可有效用于研究基因序列中的變異，例如拷貝數(shù)變異或點(diǎn)突變。數(shù)字PCR是定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。
數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個(gè)樣本分成幾到幾十萬(wàn)份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板)，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增結(jié)束后，將有熒光信號(hào)的微滴判讀為1，沒(méi)有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，終根據(jù)泊松分布原理以及陽(yáng)性微滴的比例，計(jì)算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量：不再依賴于Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接給出靶序列的起始濃度，實(shí)現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性：數(shù)字PCR可實(shí)現(xiàn)萬(wàn)分之一稀有樣本的定量，可用于極微量核酸樣本檢測(cè)、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測(cè)、表達(dá)量微小差異鑒定、單細(xì)胞基因表達(dá)等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)?huì)發(fā)揮巨大的作用，數(shù)字PCR適用于生物標(biāo)志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)、mRNA和miRNA檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究等，并對(duì)遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段，具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。相同模板進(jìn)行 96 次擴(kuò)增，終點(diǎn)處產(chǎn)物量不恒定，但 Ct 值卻極具重現(xiàn)性。全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR分析應(yīng)用
數(shù)字PCR技術(shù)min檢測(cè)下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR系統(tǒng)
dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。目前市場(chǎng)上可購(gòu)買(mǎi)到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以qPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以拷貝數(shù)（單倍體基因組當(dāng)量）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來(lái)表示特性量；以dPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來(lái)表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會(huì)造成測(cè)量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分?jǐn)?shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關(guān)系需要轉(zhuǎn)化，才能得到單位一致，數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分?jǐn)?shù)。廣州醫(yī)療系統(tǒng)認(rèn)證數(shù)字PCR系統(tǒng)
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司主營(yíng)品牌有臻準(zhǔn),美國(guó)艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia，發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大，該公司服務(wù)型的公司。是一家有限責(zé)任公司（自然）企業(yè)，隨著市場(chǎng)的發(fā)展和生產(chǎn)的需求，與多家企業(yè)合作研究，在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn)，追求新型，在強(qiáng)化內(nèi)部管理，完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時(shí)，良好的質(zhì)量、合理的價(jià)格、完善的服務(wù)，在業(yè)界受到寬泛好評(píng)。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，具有數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。雙螺旋科學(xué)儀器順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場(chǎng)需求，通過(guò)**技術(shù)，力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀。