昆明正規(guī)鼠尾膠原

一種海貍鼠尾膠原手術(shù)縫合線制備方法，其特征在于，步驟如下：(1)膠原紡絲液的配制：將備用的海貍鼠尾筋切成薄片，用無花果蛋白酶進行酶解處理，再用雙氧水溶液殺酶；將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗，然后用乙酸溶液溶脹，把溶脹后的切片分散攪拌，然后用濾網(wǎng)過濾，除去雜質(zhì)及不溶脹物，然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液；(2)手術(shù)縫合線纖維的成形：將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中，用氮氣擠壓入含有pH＝8-11、質(zhì)量濃度為50-80％的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型，再經(jīng)過質(zhì)量濃度為60-90％的乙醇水溶液的脫水浴脫水，再經(jīng)過假捻器加捻，合股后再進入含有pH＝9-11、質(zhì)量濃度為0.8-1.2％戊二醛的交聯(lián)浴中交聯(lián)，經(jīng)過水浴水洗，再經(jīng)第二次加捻，除去水及交聯(lián)劑，干燥后，在卷繞輥上卷繞即得手術(shù)縫合線。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠。昆明正規(guī)鼠尾膠原

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長[3]。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu)，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。無錫鼠尾膠原哪家便宜當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片，制備細胞爬片時，可在瓶底涂一層膠原。

鼠尾膠原：1實驗制備：實驗設(shè)備及材料：大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。 實驗內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原（兩個同學(xué)一組操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。實驗步驟：制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡；4、重復(fù)步驟2、3，直至尾腱量夠用；5、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化鉀 100 mL，用1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5 mL自組裝液，室溫放置20 min。予自組裝液自組裝24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培養(yǎng)皿中，將自組裝24 h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10 mmol/L 二水氯化鈣+150 mmol/L氯化鈉+50 mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350 μg/mL；滴加1 mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min。涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝。杭州廣州鼠尾膠原

免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。昆明正規(guī)鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備 鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上， pH 左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中，在成膠過程中需要加入 0.06體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。 需要的溶液 （均需要無菌、 預(yù)冷） 10mg/L 酚紅用于pH 指示） 0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一 般不用)，雙蒸水 200ul鼠尾膠原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中， 會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的 膠原凝結(jié)） 立即混勻。再加入 100ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后 pH 左右，如果PBS 或培養(yǎng)液中沒有加 酚紅，初次使用時需要用 pH 試紙測試)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。昆明正規(guī)鼠尾膠原