蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)

鼠尾膠原的提取步驟：配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液（用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5） 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中，稱重，再倒掉生理鹽水，酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液，（1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心，（8000rpm 5min) 其上清，留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物，加入消毒過的攪拌 子，冷房攪拌數(shù)天，得絮狀膠原。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液（用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5）； 于-20冰箱中取出鼠尾，浸泡75%或70%酒精，解凍； 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水，置于電子秤上，調(diào)零； 取鼠尾，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱，置于生理鹽水中。使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色；礦化2 d后，膠體的顏色逐漸加深至乳白色；礦化6 d后，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部，膠體顏色加深至純白色，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體，予鑷子夾起，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示：礦化2 d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部，膠原纖維部分礦化，沿著膠原纖維生長，忖度變深；礦化6 d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體，嵌入膠原纖維縱向生長。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù)，膠原纖維呈現(xiàn)黑色，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。蘇州正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價鼠尾膠原蛋白的用途是什么：顧名思義，鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì)。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質(zhì)量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150 μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠( ，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質(zhì)量130 000附近有明顯條帶，另一條帶的相對分子質(zhì)量大于170 000(圖 2) 。膠原蛋白濃度為1.8 mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6 d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察。

膠原蛋白分離提純實驗方案：提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟： 1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行 酶解， 持續(xù)一段時間待混合物變成無色、 透明、 粘稠液體后即可在 4℃， 5000g 的離心力下離心 20min， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。 2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解。 3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理，重復(fù)步驟 2 的過程 2~4 次。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳。探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實驗中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。

含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。4°C沉淀10小時，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。溫州鼠尾膠原廠家推薦

鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過濾的方法無菌化。蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)

膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液。蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)