來源于不同的組織的外泌體不僅具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。有關外泌體分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制近些年剛剛開始受到關注,與外泌體相關的被pubmed收錄的文章數(shù)量和國自然基金項目中標數(shù)量逐年增長,表明國內外對外泌體的研究興趣日益增長。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。外泌體提?。褐貜碗x心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。重慶外泌體提取試劑廠家
外泌體的形成與鑒定:首先,細胞膜內陷形成一個杯狀結構,包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關的可溶性蛋白,導致早期胞內體(early-sortingendosome,ESE)的從頭形成,或者是杯狀結構直接和已經存在的ESEs融合;trans-高爾基體和內質網也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內體(late-sortingendosomes,LSEs),較終形成MVBs(也稱為多囊內小體)。MVBs是通過endosome限制膜向內凹(即質膜雙凹)形成的,這一過程導致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,較終降解或與質膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后北京外泌體提取試劑廠家直銷外泌體的提取方法:超速離心法(差速離心)。
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA
所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。外泌體提?。嚎梢詫⒉煌南疵撊芤簯糜谠摲椒?。
外泌體可通過流式、WB(檢測指標有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應用于藥物載體、疾病診斷marker、精細醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,樣本含量低,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進行物質運輸和信息交流的重要工具,可以通過調節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,血管新生和一些病癥轉移。與細菌傳染,幫助細菌逃避免疫關系很大,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關系。外泌體的提取方法:磁珠免疫法。武漢正規(guī)外泌體提取試劑報價
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外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調節(jié)性T細胞,壓制機體的抗一些病癥免疫反應;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,從而導致一些病癥的生長和轉移。在肺病的侵襲和轉移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關報道稱,NSCLC分泌的外泌體內TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關。此外,啟動的T細胞可以通過調控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,進而促進肺病的轉移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物重慶外泌體提取試劑廠家