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轉染的注意事項：瞬時和穩(wěn)定表達DNA轉染后，轉入基因的表達可以在1－4天內檢測到。*有一部分轉入細胞的DNA被轉運到細胞核內進行轉錄并較終輸出mRNA到細胞質進行蛋白合成。幾天內，大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋；一周后就檢測不到其存在了。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。因此，表達水平與位臵無關，不會受到周圍染色體元件的影響。瞬時表達分析所需的人力和時間比穩(wěn)定表達少，但因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，實驗必須很小心。為了進行穩(wěn)定表達，轉入的基因必須能和細胞同步復制。在轉染的質粒自發(fā)整合到宿主基因組上時就會如此。在一小部分轉染的細胞中，加入的DNA通過重組整合到基因組上。包含整合DNA的細胞很少，必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定。在現(xiàn)生命可續(xù)研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程。昆明正規(guī)細胞高效轉染試劑生產(chǎn)廠家

穩(wěn)定轉染細胞系的篩選：生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉染后，在開始篩選前等待48-72小時，使細胞表達足夠量的抗性酶，保證在開始篩選時可以自我保護。轉染后48-72小時倒掉培養(yǎng)基，加入含有GENETICIN物品的培養(yǎng)基，物品的濃度根據(jù)劑量反應曲線確定，足夠殺死未轉染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度，包括細胞類型，培養(yǎng)基和血清濃度等，所以有必要對每種細胞作一個劑量反應曲線，確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間，因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下，細胞會分裂1-2次。在次培養(yǎng)細胞時使用較低劑量的物品，一般是篩選劑量的一半。篩選后的細胞一般是離散的克隆，根據(jù)實驗目的不同，可以分別純化（克?。占M行大量培養(yǎng)或染色并進行抗性克隆的計數(shù)。寧波正規(guī)細胞高效轉染試劑進貨價其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。

細胞轉染操作方法：轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。

如何有效提高細胞轉染實驗效率：1.選擇高效的轉染方法不同轉染試劑有不同的轉染方法，但大多大同小異。轉染時應跟據(jù)具體轉染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質不同，質粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉染效果可能不同，應根據(jù)實驗室的具體條件來確定較佳轉染條件。2.確保所構建載體的質量。轉染載體的構建（細菌載體，質粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉染結果。細菌載體對特定宿主細胞傳染效率較高，但不同細菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉錄細菌需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構建外，載體的形態(tài)及大小對轉染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉染的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用，轉染也很難進行，因此選擇組成或可調控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。

細胞轉染，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法；物理法：電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法；細菌介導法：逆轉錄細菌、腺細菌A. 陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點：簡單通用，適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B. 電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾，使其形成利于核酸進入的微孔。建議選擇50%~80%區(qū)間密度進行細胞轉染。金華正規(guī)細胞高效轉染試劑

轉化、轉染、轉導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經(jīng)常碰到的。昆明正規(guī)細胞高效轉染試劑生產(chǎn)廠家

影響轉染試驗的因素：細胞狀態(tài)變化：（1）轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞，也不是傳代很多次的細胞。這是因為細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。較適合轉染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，較容易轉染。（2）把握時機沒錯！轉染也有適當?shù)臅r機，相比較非分裂細胞——分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數(shù)轉染操作而言，細胞都在轉染當天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于過度生長的狀態(tài)，如細胞數(shù)量過多，互相疊加，營養(yǎng)物質耗竭，代謝廢物積聚，轉染率低下也是很正常的！昆明正規(guī)細胞高效轉染試劑生產(chǎn)廠家