含乙二醇基的多糖經(jīng)過碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無色品紅結(jié)合,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應(yīng)稱為碘酸-雪夫(PAS)反應(yīng)。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,冷卻60℃時過濾,加1mmol/L鹽酸20ml,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗處24h,無色即可放冰箱中保存,呈微紅色,則加活性炭1~2g,吸附過濾使成無色液體,放冰箱中保存。若溶液變紅,即不能再用。(2)10g/L過碘酸水溶液:過碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個月,變黃則失效。糖原染色試劑盒。自早幼粒階段以后的粒細(xì)胞和幼單核細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)。天津哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒廠家批發(fā)價
注意事項:染色時:①染色時必須嚴(yán)格按照染色操作說明書進行染色。②在染色過程中,前一個染液浸染完成后,在進行下一個染液的步驟之前,必須徹底充分水洗,使前一個染液沖洗干凈后再進行下一步驟。③每次滴加染液前,務(wù)必吸干組織上多余的水分,避免多余的水把染液稀釋了,造成染色不佳。④在滴加染液時,務(wù)必使染液完全覆蓋組織,但不能溢出圈外,避免浪費試劑。在染色時,用有色鉛筆在組織周圍劃一個圈,這樣在滴加染液時就不會使染液溢出。上??诒玫奶窃旧噭┖袉蝺r較大增強了染色效果;性能穩(wěn)定,特異性強;操作簡捷,*需1h左右。
醫(yī)院檢驗中心糖原染色操作規(guī)程:1.雪夫氏試劑:400m1 蒸餾水煮沸除去 C02,逐漸加堿性 品紅 2.08 溶解后,待冷卻至 60℃,加 1mm01 兒 HCl40ml, 再加偏重亞硫酸鈉(NaHSO:)4g,次日加活性碳 1.5g, 放置半天后過濾。配好后液體為無色透明,保存于 4℃ 冰箱中。 2.過碘酸作用液:過碘酸 1g 溶于蒸餾水 100ml 中,或取 過碘酸鉀(1tI04)0。698 加蒸餾水 100ml,微加熱使溶 解,再加濃硝酸 0.3m1,置冰箱中保存。 3.固定液:95%乙醇 90ml 與甲醛 10m1 混勻。 4.20g/l 甲基綠:甲基綠 2g 溶于 100m1 蒸餾水。 [操作] _x000c_(1) 新鮮或陳舊血片、骨髓片于固定液內(nèi) 10 分鐘。 (2) 水洗數(shù)次后,對照片先用唾液消化 30 分鐘,也可在 同一片,在其中間用蠟筆劃界,一半做對照,另一半做 測定。 (3) 水洗后,滴加過碘酸數(shù)滴于涂片上,作用 10 分鐘后, 再水洗數(shù)次。
PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1 實驗材料新鮮小白鼠肝臟、腎臟標(biāo)本各30例,均來自我室實驗材料。1.2 主要試劑1.2.1 AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,其配方:無水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2 Carnoy固定液 氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3 過碘酸溶液 0.5g過碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:過碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4 無色品紅液(Schiff氏液) 在三角燒內(nèi)加入蒸餾水500mL,煮沸后,在保持微沸的情況下,加入堿性品紅2.5g,并不斷搖動約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色)。冷卻到50℃時,過濾,加入1N鹽酸50mL,再待冷卻至25℃時加入偏重亞硫酸鈉2.5g,塞住瓶口,搖動容器以充分混合(此時顏色明顯變淡),然后避光放置或冰箱內(nèi)24h加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時溶液應(yīng)為無色。
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。過碘酸溶液和蘇木素溶液濃度更低,不宜過染。湖南口碑好的糖原染色試劑盒銷售廠家
對鹽基性染料有親合力,因此在HE染色中、切片上的粘液呈污穢藍(lán)色。天津哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒廠家批發(fā)價
PAS染色的臨床意義①幫助鑒別不典型巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞或Reed-Sternberg細(xì)胞,前者呈強陽性反應(yīng),后者呈弱陽性或陰性反應(yīng)。②幫助鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞,前者呈強陽性反應(yīng),后者呈弱陽性反應(yīng),且空泡中心為陰性反應(yīng)。③幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,后者呈強陽性反應(yīng),陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀或粗顆粒狀,有時呈紅色塊狀。白細(xì)胞系統(tǒng):急性淋巴細(xì)胞白血病時白血病性原始淋巴細(xì)胞的陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀,底色不紅;急性粒細(xì)胞白血病時,白血病性原始粒細(xì)胞的陽性反應(yīng)物質(zhì)呈均勻分布的紅色細(xì)顆粒狀或呈均勻紅色;急性單核細(xì)胞白血病時,白血病性原始單核細(xì)胞的陽性反應(yīng)物質(zhì)呈紅色細(xì)顆粒狀,彌散分布,有時在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。天津哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒廠家批發(fā)價
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