細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷。理論上儲存時間是無限的。無血清凍存液用途:無血清細胞凍存液用于醫(yī)院樣本庫細胞樣本保存。正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價
無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項:無血清細胞凍存液:含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶 液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數(shù)量,我公司無血清細胞凍存 液,為多種保護劑組合,在細胞內(nèi)外進行雙重保護,較大提高了細胞復 蘇存活率。 【產(chǎn)品用途】 1.用于免疫細胞及干細胞的存儲。 2.細胞保藏中心,用于細胞株的長期保存。 3.科研高校,細胞株凍存。 4.醫(yī)院樣本庫細胞樣本保存。 【使用方法】 1、細胞凍存前準備 (1)要求凍存的細胞在對數(shù)生長期,且活率大于90%。 (2)計算細胞密度,一般要求密度在1-3x10 cells/mL,不同細胞系 請參照附表。 2、細胞凍存過程 (1)將要凍存的細胞懸液,進行細胞計數(shù),計數(shù)后離心,800 3min即可。 度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中,根據(jù)密度調(diào)整細胞凍存 液用量。 (3)反復吹吸混勻后,分裝于細胞凍存管中,每管500ul-1000ul, (建議500ul/管)。金華無血清細胞凍存液銷售廠家無血清細胞凍存液的優(yōu)勢:不含血清,較大減少細胞污染。
無血清細胞凍存液:凍存注意:開蓋之前,用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。以下說明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存。培養(yǎng)物應該在適合傳代的時候進行收集和凍存。每管所含有的細胞應當來源于6孔板的1個培養(yǎng)孔。如果使用其他的培養(yǎng)器皿,請相應的調(diào)整體積。1. 在室溫(15 - 25°C)以300 x g離心5分鐘。2. 輕輕吸走上清液,注意不要擾動細胞團。3. 用血清學吸管以1 mL的TBD-698重懸細胞。在打散細胞團時,盡量減少細胞聚集體分解。4. 用2 mL的血清學吸管將1 mL的細胞聚集體轉移到標記好的凍存管中。5. 用以下方法凍存細胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法,每分鐘降低1度,隨后可以在 -196°C液氮長期保存。不推薦在 -80°C長期保存。逐步降溫法:-20°C保存2個小時,然后 -80°C中保存2個小時,隨后可以在 -196°C液氮中長期保存。
無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法:1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后,立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中,混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4.清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6.鏡檢后,研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。無血清細胞凍存液存儲條件:推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。
無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項:1.將分裝好的細胞凍存管,直接置于-80 度冰箱過夜保存,次日投入液氮中保存即可 備注:1、凍存過程中,第2 步在冰袋附近操作時,低溫避免保護劑對細胞造成損傷。 2、細胞凍存管一定要保證完全密封,否則在復蘇過程中有可能會炸 (1)提前開啟水浴鍋,溫度調(diào)節(jié)到37(2)將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出,迅速置于水浴鍋中融化,盡量1min 融化,時間越短,對細胞影響越小。(3)將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充 分混勻,(如細胞冷凍保存液為500ul,則加入到5ml 新鮮培養(yǎng)基中, 如細胞冷凍保存液位1ml,則加入10ml 新鮮培養(yǎng)基中。)(4)混勻后立即離心,800 轉,3min 即可離心結束后棄上清,加入預溫的新鮮培養(yǎng)液。(5)混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(二氧化碳濃度根據(jù)培 養(yǎng)基要求決定,通常為5%【注意事項】細胞系 凍存密度 備注 正常人成纖維細胞 1~310 cells/ml雜交瘤細胞 1~310 cells/ml某些hybridoma 會因冷凍濃度 太高而在解凍24小時后死去。無血清細胞凍存液使用方法:加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中。正規(guī)無血清細胞凍存液銷售廠家
將要凍存的細胞懸液,進行細胞計數(shù),計數(shù)后離心。正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價
無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優(yōu)勢:傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量的死亡。)正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價