長(zhǎng)沙細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷(xiāo)

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：優(yōu)化細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好。在開(kāi)始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先制定一個(gè)適當(dāng)?shù)姆N板方案，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開(kāi)始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài)。增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量。此外，還常用促有絲分裂刺激物(如，細(xì)菌轉(zhuǎn)化，生長(zhǎng)因子，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細(xì)胞)來(lái)活化原代培養(yǎng)細(xì)胞。貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細(xì)胞(如HL 60，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染。相反，天生為貼壁的細(xì)胞(如HEK，CHO)則可適應(yīng)懸浮生長(zhǎng)的條件。重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時(shí)換一次新鮮培養(yǎng)液。長(zhǎng)沙細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷(xiāo)

影響轉(zhuǎn)染試驗(yàn)的因素：細(xì)胞狀態(tài)變化：（1）轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞，也不是傳代很多次的細(xì)胞。這是因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過(guò)幾次傳代后達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，較容易轉(zhuǎn)染。（2）把握時(shí)機(jī)沒(méi)錯(cuò)！轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)，相比較非分裂細(xì)胞——分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA。因此對(duì)大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言，細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)不應(yīng)處于過(guò)度生長(zhǎng)的狀態(tài)，如細(xì)胞數(shù)量過(guò)多，互相疊加，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗竭，代謝廢物積聚，轉(zhuǎn)染率低下也是很正常的！石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長(zhǎng)短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素。

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對(duì)大分子物質(zhì)來(lái)說(shuō)是個(gè)不可透過(guò)的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負(fù)電荷。為了使核酸穿過(guò)細(xì)胞膜，研究人員開(kāi)發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類(lèi)：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個(gè)瞬時(shí)的孔從而導(dǎo)入DNA。然而，沒(méi)有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響較小，并且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時(shí)候，在開(kāi)展正式實(shí)驗(yàn)前要多做預(yù)試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度、細(xì)胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時(shí)間等等。2.電壓過(guò)大做電轉(zhuǎn)的時(shí)候，如果電壓太大，往往會(huì)發(fā)生細(xì)胞大量死亡的情況。不同的細(xì)胞，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預(yù)實(shí)驗(yàn)，多摸索條件。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外，就是進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞的抗損傷能力是較強(qiáng)的。細(xì)胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6 μg，如果﹥10μg，轉(zhuǎn)染效率也較大降低。電擊后，應(yīng)該將DNA和細(xì)胞混合液在室溫下放置10分鐘，使細(xì)胞恢復(fù)損傷。建議選擇50%~80%區(qū)間密度進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.不注意細(xì)節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預(yù)溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應(yīng)當(dāng)一滴一滴地滴下來(lái)，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細(xì)枝末節(jié)，但是，如果不注意的話，也會(huì)造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細(xì)胞狀態(tài)不好細(xì)胞狀態(tài)不好，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。一般進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。如果是貼壁細(xì)胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如果是懸浮細(xì)胞的話，應(yīng)該是6X105個(gè)/孔（24孔板），一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液，轉(zhuǎn)染前用無(wú)血清培養(yǎng)基或PBS洗細(xì)胞一次。轉(zhuǎn)染的整個(gè)過(guò)程都不應(yīng)該有物品。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點(diǎn)。天津細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷(xiāo)價(jià)

在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點(diǎn)。長(zhǎng)沙細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷(xiāo)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑。另外，為了保證無(wú)血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng)，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。長(zhǎng)沙細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷(xiāo)