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來源: 發(fā)布時間:2021-11-03

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達,目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復合物與多個mRNA結(jié)合,從而阻滯整個生物通路。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優(yōu)勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達,與75例健康者相比,發(fā)現(xiàn)了兩種高表達的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估,結(jié)果顯示,12個一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達。Cazzoli等收集了30個血漿樣本,發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明顯升高,用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積(AUC)為0.908。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成。杭州外泌體提取試劑直銷廠家

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在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進行稀釋,然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片,制成體液樣本備用;體液樣本純化:通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾,進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì),靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用;外泌體提?。簩⑸鲜龀恋砦镉肞BS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,置于80℃儲存?zhèn)溆?。此提取方法條件復雜,成本高,專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來;根據(jù)外泌體表面的特異生物化學特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。廈門正規(guī)外泌體提取試劑廠家外泌體表面有其特異性標記物,用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合。

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用于外泌體提取的體液收集注意事項:1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉(zhuǎn)8-10次使樣本與抗凝劑混勻,避免劇烈搖晃?;靹蚝螅瑢⒃嚬芄潭ù怪狈胖糜陔x心分離器,在頂部記錄抽血的準確時間,因為抽血與離心之間的時間間隔可能是一個影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的,若時間過長將導致外泌體數(shù)量增加。血小板極易因抽血時的物理因素而并釋放出外泌體,其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時間。除了血液黏度,體內(nèi)血液的各項指標在1天中變化很大。生理節(jié)律會對血小板的產(chǎn)生很大的影響。白細胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細胞和細胞會隨時間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時間變化。目前尚無設(shè)計較好的實驗對證實不同時間血液中外泌體的變化,故應在相同的時間采集樣本。目前飲食是否會對EV產(chǎn)生影響尚未可知,但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型、數(shù)量和作用,故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時間進行。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣。

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作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時會處于“開啟”狀態(tài)。在80%~95%的胰腺導管腺?。≒DAC)當中,這個基因發(fā)生突變,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,并且比他們的合成對應物脂質(zhì)體(liposome)更加高效。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復雜性和優(yōu)勢。德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學助理教授ValerieLeBleu博士說,“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比,外泌體表現(xiàn)出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優(yōu)異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細胞的吞噬作用。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。合肥正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。杭州外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、一些病癥細胞、間充質(zhì)干細胞等。杭州外泌體提取試劑直銷廠家

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原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代 細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應用于分子、 細胞生物學和生物醫(yī)學基礎(chǔ)研究,如 蛋白質(zhì)組學、基因組學、 細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學研究等,還可應用于當今熱門的 生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如 藥物篩選、 藥物代謝和毒理研究、**藥物的研究等。原代細胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用,市場前景廣闊。