關(guān)于細胞株和細胞系以及原代細胞的區(qū)別:1、獲取方法不同,原代細胞是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞;細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養(yǎng)物;細胞系是原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)開始傳代成功后所繁殖的細胞群體。2、原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現(xiàn)停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代,這種傳代細胞叫做細胞株;細胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。當細胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”,不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且?guī)в凶兊奶攸c,有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去,這種傳代細胞稱為細胞系。原代細胞是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。重慶原代細胞分離試劑盒直銷價
原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和部位后立即進行培養(yǎng)。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù)。原代細胞在培養(yǎng)的過程中,也可能產(chǎn)生基因突變而形成無限傳代的細胞株,傳代次數(shù)越多,就越有可能變成細胞株(基因缺陷型),因此科學(xué)界也通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。較常用的原代細胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)北京正規(guī)原代細胞分離試劑盒進貨價用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
原代細胞的培養(yǎng)和維持:(1)原代細胞的培養(yǎng)方法原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的開始培養(yǎng),是建立細胞系的靠前步,是一項基本技術(shù)。原代細胞較接近和較能反映體內(nèi)生長特性,適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。①組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
原代細胞的培養(yǎng)與建系細胞的來源多樣,培養(yǎng)方法也各不相同,凡是來源于胚胎、組織部位及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進行再次培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化,經(jīng)大量擴增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細胞群,稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ),只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和掌握其他方法,本章重點敘述常用的基本技術(shù)。靠前節(jié)原代細胞的取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件,是進行細胞培養(yǎng)的靠前步,若取材不當,將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)原代細胞作為更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。
原代細胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用,市場前景廣闊。原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和部位后立即進行培養(yǎng)。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實際上,通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞如何傳代接種:原代細胞(primaryculturecell)是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅普遍應(yīng)用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應(yīng)用于當今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、藥物的研究等。盡快使接種的細胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。武漢正規(guī)原代細胞分離試劑盒直銷價
細胞適應(yīng)體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。重慶原代細胞分離試劑盒直銷價
原代細胞的獲?。?.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法,取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間,期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法,在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細胞的生長狀況,需觀察其是否貼壁,是否污染,組織塊法要觀察是否有細胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細胞狀態(tài)判斷正常貼壁細胞在培養(yǎng)幾天后,會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底,有的呈纖維狀,有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細胞圖(左:小鼠成纖維細胞;右:雞胚成纖維細胞;下:人成纖維細胞)。重慶原代細胞分離試劑盒直銷價