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來源: 發(fā)布時間:2024-09-04

原代細(xì)胞的培養(yǎng)和維持:(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的開始培養(yǎng),是建立細(xì)胞系的靠前步,是一項基本技術(shù)。原代細(xì)胞較接近和較能反映體內(nèi)生長特性,適宜用于藥物敏感性試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。①組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。要避免經(jīng)常翻動和振動,否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷

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原代細(xì)胞的定義:原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和部位后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實際上,我們通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞因為可以模擬機(jī)體的功能,主要用于:生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究。原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒,以便可以立即用于接種細(xì)胞,并置于培養(yǎng)箱中,使用cellsystems的原代細(xì)胞時,復(fù)蘇的時候不建議離心,第二天換個液就可以。蕪湖原代細(xì)胞分離試劑盒報價它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。

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使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測實驗注意事項:1.細(xì)胞接種:一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板(細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml),使做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度在30-50%;如果細(xì)胞是原代細(xì)胞,接種密度可以密一些,細(xì)胞計數(shù)在2*10^6cell/ml;懸浮細(xì)胞可以在轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種/鋪板(細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml),待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度30-40%。2.為了能在使用時有較好的轉(zhuǎn)染效果,靠前次使用建議您用24孔板做,每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可。將較佳轉(zhuǎn)染條件(siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例)放大到對應(yīng)的孔板即可~

細(xì)胞傳代的方法都有哪些:根據(jù)不同的細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代;部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打即可傳代;懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打。原代培養(yǎng)的開始傳代應(yīng)注意的問題?細(xì)胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前,不要急于傳代;原代培養(yǎng)時細(xì)胞多為混雜生長,不同的細(xì)胞有不同的消化時間,因此要根據(jù)需要注意觀察及時處理,并根據(jù)不同細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受時間而分離和純化所需要的細(xì)胞;吹打細(xì)胞時動作要輕巧盡可能減少對細(xì)胞的損傷;開始傳代時細(xì)胞接種數(shù)量要多一些,使細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境而利于細(xì)胞生存和增值加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

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原代細(xì)胞的獲?。?.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法,取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間,期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法,在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細(xì)胞的生長狀況,需觀察其是否貼壁,是否污染,組織塊法要觀察是否有細(xì)胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細(xì)胞狀態(tài)判斷正常貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后,會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底,有的呈纖維狀,有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細(xì)胞圖(左:小鼠成纖維細(xì)胞;右:雞胚成纖維細(xì)胞;下:人成纖維細(xì)胞)。相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長培養(yǎng)基必須包含的基本成分。寧波正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家現(xiàn)貨

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原代細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)及作用:1.細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasm)細(xì)胞膜包著的黏稠透明的物質(zhì),叫做細(xì)胞質(zhì)。在細(xì)胞質(zhì)中還可看到一些帶折光性的顆粒,這些顆粒多數(shù)具有一定的結(jié)構(gòu)和功能,類似生物體的各種部位,因此叫做細(xì)胞器。例如,在綠色植物的葉肉細(xì)胞中,能看到許多綠色的顆粒,這就是一種細(xì)胞器,叫做葉綠體。綠色植物的光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的。2.細(xì)胞核原代細(xì)胞質(zhì)里含有一個近似球形的細(xì)胞核(nucleolus),是由更加黏稠的物質(zhì)構(gòu)成的。細(xì)胞核通常位于細(xì)胞的,成熟的植物細(xì)胞的細(xì)胞核,往往被液泡推擠到細(xì)胞的邊緣。細(xì)胞核中有一種物質(zhì),易被洋紅、蘇木精、甲基綠等堿性染料染成深色,叫做染色質(zhì)(chromatin)。生物體用于傳種接代的物質(zhì)即遺傳物質(zhì),就在染色質(zhì)上。細(xì)胞核的機(jī)能是保存遺傳物質(zhì),控制生化合成和細(xì)胞代謝,決定細(xì)胞或機(jī)體的性狀表現(xiàn),把遺傳物質(zhì)從細(xì)胞(或個體)一代一代傳下去。但細(xì)胞核不是孤立的起作用,而是和細(xì)胞質(zhì)相互作用、相互依存而表現(xiàn)出細(xì)胞統(tǒng)一的生命過程。細(xì)胞核控制細(xì)胞質(zhì);細(xì)胞質(zhì)對細(xì)胞的分化、發(fā)育和遺傳也有重要的作用原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷