寧波石家莊RNA提取試劑

經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA：這個事實(shí)可能會刷不少新手甚至老手的三觀，但確有實(shí)驗(yàn)支持：經(jīng)典Trizol法會選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn)，源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學(xué)家，專做RNA相關(guān)的研究，包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個奇怪的“現(xiàn)象”，即貼壁細(xì)胞在消化之后，會有一些miRNA的豐度突然降低，看起來好像是被快速“降解”掉了，并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn)，這個“現(xiàn)象”難以重復(fù)：如果用Trizol做實(shí)驗(yàn)，就一定是陽性結(jié)果，而用試劑盒提RNA，就重復(fù)不出來。難道是號稱能提總RNA的Trizol方案出了問題？確實(shí)如此。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典的Trizol方案會使得低GC比的miRNA丟失。買點(diǎn)無酶的吸頭、離心管，找一個普通的試驗(yàn)臺，穿好實(shí)驗(yàn)服戴好手套，保護(hù)好自己就好。寧波石家莊RNA提取試劑

在細(xì)胞中，根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉(zhuǎn)運(yùn)RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板，內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄；tRNA是mRNA上堿基序列（即遺傳密碼子）的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者；rRNA是組成核糖體的組分，是蛋白質(zhì)合成的工作場所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA，像是組成剪接體的snRNA，負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA，以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等，可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性，即具有酶的活性，這類RNA被稱為核酶。在病菌方面，很多病菌只以RNA作為其中的遺傳信息載體（有別于細(xì)胞生物普遍用雙鏈DNA作載體）。寧波石家莊RNA提取試劑常用RNA提取方法有：1TRIzol法；2TRIzol+過柱法；3CTAB+過柱法；4試劑盒法。

RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會推薦，在異丙醇沉淀后，用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上，任何提取實(shí)驗(yàn)，都會在純度和得率這一對矛盾中取舍。醇沉淀會將脂溶性雜質(zhì)去掉，但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會連同RNA一起被沉淀下來。因此，多整幾次，并不會讓RNA的純度翻倍，反而還會有降低得率的風(fēng)險。一般情況下，異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是，倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低，那就只能放棄純度，在低溫沉淀數(shù)小時，以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水，以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過，在使用DEPC的過程中，又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水，會有一股“香甜”的味道。許多人會以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上，這只是DEPC分解成CO2和乙醇后，產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。

核糖核酸RNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補(bǔ)配對原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息傳遞過程中的橋梁。tRNA的功能是攜帶符合要求的氨基酸，以mRNA為模板，合成蛋白質(zhì)。核糖核酸由至少幾十個核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵連接而成的一類核酸,因含核糖而得名,簡稱RNA。RNA普遍存在于動物、植物、微生物及某些病菌和噬菌體內(nèi)。RNA和蛋白質(zhì)生物合成有密切的關(guān)系。RNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補(bǔ)配對原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中，轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(TransferRNA,tRNA)是攜帶與三聯(lián)體密碼子對應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合，而后核糖體RNA(RibosomalRNA,rRNA)將各個氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。再采集樣本之后馬上加入 DNA/RNA Shield，可以快速降解掉 RNase 等蛋白物質(zhì)。

RNA穩(wěn)定方法：1.在裂解緩沖液中立即溶解，使RNase失活。然后樣品可以立即處理或冷凍保存。2.浸泡在穩(wěn)定試劑中(如DNA/RNAShield)，使核酸酶失活，并在環(huán)境溫度下長時間保護(hù)核酸。這對正在實(shí)地收集樣本或處理珍貴的病人樣本(例如組織活檢、全血等)的研究人員特別有幫助。確保樣品完全溶解：在RNA提取過程中，較大限度地提高RNA產(chǎn)量和質(zhì)量的較佳方法是保證樣品的完全裂解。然而，并不是所有的樣本都對相同的裂解方案敏感。例如，血細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、PBMCs等)和微生物細(xì)胞往往更難以有效地溶解。光光添加基于洗滌劑的裂解緩沖液可能并不總是足夠的。為了提高裂解效果，可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配，或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。RNA提取試劑注意事項(xiàng)：有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白。貴陽RNA提取試劑生產(chǎn)廠家

研缽150度烘烤4小時，離心管、吸頭用DEPC處理。寧波石家莊RNA提取試劑

酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)：一、原理簡介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶，然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn)：1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好，純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn)，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程，RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨(dú)有的RL裂解液配方，可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程，提取RNA純度更高。5、有效的去除了無用的5S在總RNA中含量，提高了純度。寧波石家莊RNA提取試劑