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外泌體(exosomes，Exos)是細(xì)胞分泌的一種膜囊泡，因其可以將供體細(xì)胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等傳遞到受體細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞之間的信息交流及物質(zhì)交換，并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運(yùn)藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1)。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成，使其可以穿透許多生物膜，提高藥物的運(yùn)輸效率和靶向性，可以穩(wěn)定存在于血液中，納米級(jí)尺寸明顯增強(qiáng)藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR)。目前，許多抗藥物、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法，使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制。靜置10～15分鐘，留取沉淀物備用。深圳正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜

外泌體（exosomes）是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡，來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)，直徑約為30-150nm，密度在1.13-1.21g/ml，天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中，同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體，人體中大約有1014個(gè)外泌體，大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸（DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等）、蛋白和脂類，在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用徐州正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。

2018版《指導(dǎo)要求》說明外泌體沒有限定單一的分離手段，多種手段都可以進(jìn)行細(xì)胞外囊泡的富集?！吨笇?dǎo)要求》編寫者們認(rèn)為“高回收率，低特異性”的富集手段是指那些富集囊泡的同時(shí)會(huì)有大量的非囊泡組分被富集，甚至細(xì)胞的整個(gè)分泌組都會(huì)被摻入其中，歸入這一類的分離手段主要包括通過改變電荷或通過高聚物作用的沉淀試劑盒、低分子量截流的超濾分離、超長(zhǎng)時(shí)間和超高離心力的超速離心等。Wako的MagCapture?ExosomeIsolationKitPS（產(chǎn)品編號(hào)299-77603（2tests），293-77601（10tests）），使用PS親和法對(duì)外泌體進(jìn)行提取，損失小且能獲得高純度的外泌體。

1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng)，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：抽血時(shí)間。

外泌體的提取方法：1、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對(duì)關(guān)系而對(duì)溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，首先被流動(dòng)相洗脫出來；小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強(qiáng)地滯留，更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡(jiǎn)單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。廣州外泌體提取試劑推薦廠家

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外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等深圳正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜