永生化的細胞系往往相當健壯,因此,使用實驗室自制的凍存培養(yǎng)基,效果也不錯。典型的配方是在生長培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清,或只是在血清中加入10%的DMSO。DMSO的作用是取代細胞中的一些水,以防止冰晶形成,刺穿細胞。據(jù)賽默飛世爾科技的較深科學家RhondaNewman介紹,DMSO還能防止細胞在冷凍期間發(fā)生收縮,而后在解凍時又變得腫脹。血清,這種富含營養(yǎng)成分的物質,直接支持細胞。“當細胞處于這種營養(yǎng)豐富的環(huán)境時,它們能夠更好地復蘇。無血清細胞凍存液:凍存細胞復蘇率在90%以上。濟南無血清細胞凍存液單價
要折騰嬌貴的細胞寶寶,必須要在無菌超凈環(huán)境下才行。超凈工作臺,所有的儀器用品提前滅菌,培養(yǎng)箱什么的定期用酒精擦干凈。微生物污染對細胞的影響經常是開始的時候沒發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)的時候已經結束了,所以千萬要小心。除了操作中的各種小細節(jié),還有一個實驗雷區(qū),就是配制細胞凍存液。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求,根據(jù)細胞實際判斷成分配比,還建議使用程控儀,注意配制溫度,一個不小心就又會影響細胞的存活效果。學霸君給各位養(yǎng)細胞的科研汪們帶來一款細胞神器——WakoBAMBANKER®即用型無血清細胞凍存液。濟南無血清細胞凍存液報價無血清細胞凍存液產品性能:傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。
細胞凍存和復蘇的原則:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內冰晶的產生,從而使細胞產生內源性的機械損傷,引起細胞內環(huán)境滲透壓,PH,電解質等的改變,進而促使細胞死亡。細胞凍存液除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液.細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費,而且細胞一旦開始原代培養(yǎng),它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。
無血清細胞凍存液:1.逐滴加入5-7mL的預熱的培養(yǎng)基到15mL的離心管中,加入的同時輕輕混勻。2.室溫(15-25°C)以300xg離心5分鐘。3.吸出培養(yǎng)基,使細胞沉淀完好無損。使用2mL血清移液管輕輕將細胞沉淀重懸于1mL的培養(yǎng)基中。小心保持細胞作為聚集體。4.將0.5mL的細胞混合物轉移到含有培養(yǎng)基的預包被的6孔板的培養(yǎng)孔中(例如,每個冷凍管可以鋪板兩個孔)。注意:鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細胞聚集體數(shù)量進行調整。通常在復蘇后,要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細胞聚集體數(shù)量。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱??焖偾昂笞笥业膿u晃培養(yǎng)板數(shù)次,將細胞聚集體分布均勻。24小時內不要移動培養(yǎng)板。無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合。
冷凍速率:冷凍速率是指降溫的速度,直接關系到冷凍效果。冷凍速度不同,細胞內水分向外流動的情況也不相同,不同的冷凍速度既然能使細胞內發(fā)生不同的生理變化,也可以對細胞產生不同的損傷。超快速玻璃化冷凍對細胞存活來說是較為理想的冷凍方法。細胞內外呈玻璃化凝固,無冰晶形成或形成很小的冰晶,對細胞膜和細胞器不致造成損傷,細胞也不會在高濃度的溶質中長時間暴露而受損。不同細胞的較適冷凍速率不同。小鼠骨髓干細胞、酵母、人紅細胞的較適冷凍速率分別為1.6℃/min、7℃/min和200℃/min。細胞與細胞之間的較適冷凍速率可在1.6℃~300℃/min,故對一種細胞進行冷凍保存之前,首先需要測定其較適冷凍速率,以保證獲得較高的冷凍存活率。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢:通用型,適用于凍存各種細胞系、原代細胞。合肥南昌無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液產品性能:凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分。濟南無血清細胞凍存液單價
細胞凍存和復蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內冰晶的產生,從而使細胞產生內源性的機械損傷,引起細胞內環(huán)境滲透壓,PH,電解質等的改變,進而促使細胞死亡。在過去的幾十年中,科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,并配合手工使細胞從4℃,-20℃,-80℃到液氮中逐步轉移使其達到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短,不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大,人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結果帶來了不穩(wěn)定性。濟南無血清細胞凍存液單價