糖原染色法:染色原理細(xì)胞胞漿中存在糖原或多糖類物質(zhì)(如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等),過碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化為二醛基,其與Schiff試劑中的無色品紅結(jié)合后呈現(xiàn)紫紅色,沉積在細(xì)胞內(nèi)多糖所在之處。染色步驟:1.組織石蠟包埋切片后脫蠟至水,蒸餾水洗2min(細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗);2.滴加過碘酸溶液,氧化5min;3.蒸餾水洗10min;4.滴加Schiff試劑,侵染10-20min;5.傾去Schiff試劑,流水沖洗10min;6.滴加蘇木素染色液,染核1-2min;7.流水沖洗5min;8.酸性乙醇分化液分化~無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化。正規(guī)糖原染色試劑盒哪家便宜
注意事項(xiàng):染色前:①切出的石蠟切片要好,不能有皺褶或者刀痕,切片不能太厚。②撈片時(shí),較好一張玻片撈一個(gè)組織,組織較好位于玻片的中間,美觀的同時(shí)也利于脫蠟(有時(shí)二甲苯的液面低于組織片的時(shí)候,達(dá)不到脫蠟的目的)。③石蠟切片脫蠟到水時(shí),一定要注意組織切片脫蠟務(wù)必要徹底(脫蠟時(shí)間不能太少)以使脫蠟后的組織達(dá)到真正的“干凈”。否則剩余的未脫干凈的石蠟粘附在組織表面,在染色時(shí)染色液未能充分與組織接觸,較終導(dǎo)致染色效果不佳,甚至染不上顏色。④在染色過程中較好不要在玻片上貼標(biāo)簽紙,以避免脫蠟時(shí)把標(biāo)簽紙也浸沒,致使標(biāo)簽紙上的膠黏到玻片上,造成染色不佳。福建提供糖原染色試劑盒量大從優(yōu)糖原染色顯示在肝或心肌細(xì)胞內(nèi)有大量糖原存在即可確診.。
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎┎籗chiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時(shí)應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液。
糖原染色試劑盒。含乙二醇基的多糖經(jīng)過碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無色品紅結(jié)合,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應(yīng)稱為碘酸-雪夫(PAS)反應(yīng)。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,冷卻60℃時(shí)過濾,加1mmol/L鹽酸20ml,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗處24h,無色即可放冰箱中保存,呈微紅色,則加活性炭1~2g,吸附過濾使成無色液體,放冰箱中保存。若溶液變紅,即不能再用。(2)10g/L過碘酸水溶液:過碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個(gè)月,變黃則失效可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細(xì)胞。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個(gè)方面:PAS染色時(shí)需于暗處加蓋反應(yīng),染色時(shí)間10~20min(染色時(shí)間長短取決于試劑的質(zhì)量和環(huán)境溫度,SO濃度高,染色時(shí)間適當(dāng)縮短;環(huán)境溫度高,染色時(shí)間也應(yīng)適當(dāng)縮短,反之則需適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間)。染色過程中不能接觸伊紅,以免造成顏色誤差[4]。作糖原染色時(shí),較好作消化對照,即取兩張連續(xù)切片,其中一張脫蠟至水后,用1%淀粉酶于37℃消化30min,水洗后與不經(jīng)消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,如經(jīng)消化處理的切片染色陰性,不經(jīng)消化處理的切片染色陽性,即肯定為糖原[6]。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,不能保存,因此,必須現(xiàn)配現(xiàn)用,用過一次即應(yīng)廢棄。各種試劑必須是化學(xué)純或者分析純。器皿、染色缸必須潔凈而干燥。對某種鹽基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺藍(lán)有異染性。山東口碑好的糖原染色試劑盒直銷價(jià)
細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。正規(guī)糖原染色試劑盒哪家便宜
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個(gè)方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時(shí)固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應(yīng)避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動(dòng)到細(xì)胞一側(cè)的現(xiàn)象,多數(shù)人認(rèn)為是由于固定劑把細(xì)胞內(nèi)的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成。其他組織應(yīng)用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,是針對糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應(yīng)措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨(dú)使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳正規(guī)糖原染色試劑盒哪家便宜