酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學(xué)破壁法,其方法是在一定堿濃度下,使構(gòu)成細(xì)胞壁的蛋白質(zhì)、脂肪及糖的化合物得到水解,從而破壞細(xì)胞壁,此法對堿的濃度及提取溫度要求比較嚴(yán)格,堿的濃度不可過濃,應(yīng)控制在1%,并且對提取溫度也有一定的要求,提取時間短。因?yàn)樵谶^分劇烈的條件下,容易使核糖核酸分子內(nèi)的酯鍵斷裂,使核糖核酸降解而影響收得率。酵母菌作為重要的模式生物,是遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究材料。由于酵母菌的細(xì)胞壁成分復(fù)雜,且較原核生物厚,難于破碎,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多。如何有效地破碎細(xì)胞壁并保證RNA的完整性,是獲得高質(zhì)量酵母菌總RNA的關(guān)鍵問題??俁NA的提取方法還有很多,如Trizol法、異硫氰酸胍法、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法、熱硼酸鹽法等,這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn),不同的方法適用于不同類型的材料。RNA提取試劑注意事項(xiàng):必須戴一次性手套操作。武漢RNA提取試劑價格
RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細(xì)胞時能保持RNA的完整性。無論是人、動物、植物還是細(xì)菌組織,該方法對少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡單性允許同時處理多個樣品,所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染,故而能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等。和進(jìn)口品牌實(shí)驗(yàn)對照顯示,公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達(dá)到甚至超過了進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量~武漢RNA提取試劑價格總RNA提取試劑:適用范圍普遍,可以從動物組織。
細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):1.有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)胞核RNA。2.方便快捷的離心柱操作方式。3.提取的RNA,品質(zhì)高,產(chǎn)量多。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含MicroRNA)。5.純化的RNA可用于任何應(yīng)用,包括RT-PCR,qRT-PCR,RNA-Seq,陣列等。6.細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR。7.試劑盒可用于哺乳動物細(xì)胞或者組織樣品的提取。在某些情況下,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,而不是總RNA。例如,在一些表達(dá)譜研究中,較好能夠提取成熟的細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasmic)RNA?;蛘?,在研究分析未剪接的RNA前體時,提取細(xì)胞核(Nuclear)RNA會是一個更好的選擇。然而,市面上絕大多數(shù)廠家只能為您分別提供2種試劑盒來提取細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的RNA,不僅費(fèi)用高昂,而且浪費(fèi)大量的材料與時間。
RNA組成結(jié)構(gòu):RNA和DNA一樣,也是由各種核苷酸通過3′,5′-磷酸二酯鍵連接構(gòu)成的多核苷酸鏈,但與DNA有一系列差異。1.在化學(xué)組成方面,RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每個tNA分子含有一個胸腺嘧啶,這是在RNA鏈合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少數(shù)DNA含有少量核糖,但這些個別的例外并不能以此否定兩類核酸組成上的差異。2.RNA一級結(jié)構(gòu)的概念雖與DNA相同.但其基本結(jié)構(gòu)單位是核糖核苷酸而不是脫氧核糖核苷酸。此外,部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列,而且RNA一級結(jié)構(gòu)中沒有DNA那樣復(fù)雜的順序組織。3.絕大多數(shù)RNA為單鏈分子,單鏈可自身折迭形成發(fā)夾(hairpin)樣結(jié)構(gòu)而有局部雙螺旋結(jié)構(gòu)的特征,這是各種RAN空間結(jié)構(gòu)的共同特征。RNA局部雙螺旋結(jié)構(gòu)中堿基互補(bǔ)配對規(guī)律是A對U和G對C。由于RNA分子內(nèi)部不能較全形成堿基配對,故其堿基克分子比A不等于U,G不等于C,不存在DNA堿基比例的Chargaff規(guī)律。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。
新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨(dú)特裂解劑/裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉(zhuǎn)移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強(qiáng),適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。快速,簡捷,單個樣品操作一般可在1小時內(nèi)完成。多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9以上,可直接用于PCR,Northern-blot和各種酶切反應(yīng)RNA在260nm波長處有較大的吸收峰。武漢RNA提取試劑價格
以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。武漢RNA提取試劑價格
目前,主流的RNA提取方法有Trizol法、離心柱法和磁珠法。其中,Trizol法與離心柱法相比,提取效果相當(dāng),但因其對操作者帶來的毒性,現(xiàn)在越來越被棄用。磁珠法可以針對大批量樣本處理,適合機(jī)器自動化提取,但是提取核酸純度低,提取得率低,且使用成本較高。對于拭子RNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數(shù)不是很多的實(shí)驗(yàn)室,選擇的拭子RNA提取方法應(yīng)是離心柱法。近來,隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展,從口腔拭子、泌尿生殖道拭子、痰液等樣本中進(jìn)行RNA提取的試劑盒的應(yīng)用價值越來越大,如tumour早期診斷、遺傳病檢測和病原體傳染核酸檢測等。拭子RNA提取效果在很大程度上取決于采樣質(zhì)量、試劑盒性能等,特別是試劑盒的性能較大影響了拭子核酸的基因檢測和各種研究的開展。武漢RNA提取試劑價格