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鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理，收集上清液；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調節(jié)pH=6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng)，它會牢牢地留住就要流失的鈣質。長沙正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據(jù)Birkedal-Hansen方法，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。鼠尾膠原單價I型膠原蛋白分布非常普遍，是主纖維束的主要成分。

膠原蛋白的提取方法：酶法提?。好阜ㄌ崛∈抢玫鞍酌甘鼓z原溶解，水解條件溫和，反應速率快，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構，蛋白純度高，理化性質穩(wěn)定，且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復合酶。工藝可選擇一步法，即利用酶液直接提??；二步法，即先用酸或者堿進行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預處理革屑，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對提取結果的影響，給出了酶對膠原提取較佳工藝配比，酶與牛腱的質量比為0.1時效果較佳，而使用無花果蛋白酶時，0.01的配比較佳。

實驗應用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。可直接或間接參與細胞的附著。

含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。對于生物科研汪們來說，大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶。蕪湖正規(guī)鼠尾膠原哪里買

將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉移到培養(yǎng)箱內(nèi)。長沙正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯筒牧鲜侵魏霉侨睋p的中心環(huán)節(jié)。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學者孜孜以求的目標。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結構上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長。本研究仿生天然骨組織的分子結構，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。長沙正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷