PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學(xué)染色,在臨床病理診斷上占著相當(dāng)重要的位置??梢赃x用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細(xì)胞。山東糖原染色試劑盒推薦廠家
PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1實(shí)驗(yàn)材料新鮮小白鼠肝臟、腎臟標(biāo)本各30例,均來自我室實(shí)驗(yàn)材料。1.2主要試劑1.2.1AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,其配方:無水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2Carnoy固定液氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3過碘酸溶液0.5g過碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:過碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4無色品紅液(Schiff氏液)在三角燒內(nèi)加入蒸餾水500mL,煮沸后,在保持微沸的情況下,加入堿性品紅2.5g,并不斷搖動(dòng)約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色)。冷卻到50℃時(shí),過濾,加入1N鹽酸50mL,再待冷卻至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉2.5g,塞住瓶口,搖動(dòng)容器以充分混合(此時(shí)顏色明顯變淡),然后避光放置或冰箱內(nèi)24h。山東咨詢糖原染色試劑盒進(jìn)貨價(jià)幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,腺細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。
網(wǎng)狀纖維的變化,反映了疾病的發(fā)生和發(fā)展的不同過程,對疾病的診斷有極大意義。網(wǎng)狀纖維的多少、粗細(xì)緊密、疏松或斷裂,都是病理檢驗(yàn)的重要指標(biāo),尤其是在臨床病理診斷中,可根據(jù)其存在和分布來鑒別與肉瘤。而在HE染色標(biāo)本上,網(wǎng)狀纖維不易顯色。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學(xué)染色,在臨床病理診斷上占著相當(dāng)重要的位置。網(wǎng)狀纖維染色:網(wǎng)狀纖維是非常細(xì)而短的纖維,大量堆積時(shí)則形成致密的網(wǎng)狀,故有網(wǎng)狀纖維之稱。疏松組織中網(wǎng)狀纖維比較少,它多分布在結(jié)締組織與其它組織交界處,如在上皮組織與結(jié)締組織交界處的基膜內(nèi),血管周圍以及造血部位,內(nèi)分泌腺的腺細(xì)胞團(tuán)索和外分泌腺的腺末房周圍等處均有豐富的網(wǎng)狀纖維。
PAS染色的臨床意義:1.紅細(xì)胞系統(tǒng):①紅血病或紅白血病時(shí)幼紅細(xì)胞可呈陽性反應(yīng),有時(shí)陽性反應(yīng)幼紅細(xì)胞的百分比增高,陽性反應(yīng)的程度也很強(qiáng)。有時(shí)紅細(xì)胞也呈陽性反應(yīng)。②缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血(又稱地中海貧血)以及骨髓增生異常綜合征時(shí)幼紅細(xì)胞可呈陽性反應(yīng),有時(shí)陽性反應(yīng)幼紅細(xì)胞的百分比也較高。有時(shí)紅細(xì)胞也可呈陽性反應(yīng)。③巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時(shí),幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng),有時(shí)*個(gè)別幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)如PAS染色可顯示糖原、黏液等。
糖原染色生物技術(shù)優(yōu)勢:(1)擁有針對不同組織的特殊固定液;(2)擁有日本進(jìn)口的各種染料,保證切片染色效果;(3)擁有千錘百煉的專業(yè)人才隊(duì)伍,保證實(shí)驗(yàn)快速、有效的完成。實(shí)驗(yàn)樣本要求:(1)植物材料在選擇時(shí)須盡可能不損傷植物體或所需要的部分;(2)動(dòng)物材料取用時(shí)需對動(dòng)物施以麻醉,常用的麻醉劑有氯仿和,或?qū)?dòng)物殺死后迅速取出所需要的組織;(3)取材必須新鮮,這一點(diǎn)對于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要,應(yīng)該盡可能割取生活著的組織塊,并隨即投入固定液,固定液與組織塊的體積比應(yīng)在10:1;(4)切取材料時(shí)刀要銳利,避免因擠壓細(xì)胞使其受到損傷;(5)切取的材料應(yīng)小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部。一般厚度不超過3mm,大小不超過5×5m㎡。加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時(shí)溶液應(yīng)為無色。山東糖原染色試劑盒推薦廠家
操作簡單方便,1h內(nèi)即可完成反應(yīng)。山東糖原染色試劑盒推薦廠家
糖原及粘液染色法注意事項(xiàng):1、糖原的固定要及時(shí),而且標(biāo)本要新鮮。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細(xì)胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學(xué)純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時(shí)可考慮適當(dāng)?shù)脑黾佑昧?。其次考慮堿性品紅本身,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號,其效果就可能不同,應(yīng)特別引起注意。山東糖原染色試劑盒推薦廠家